【摘要】：糖尿病性膀胱病(diabetic cystopathy,DCP)是糖尿病患者常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一,在2004年,Lee等統(tǒng)計(jì)DCP的患病率為25%?90%。在2011年,統(tǒng)計(jì)約有22.5%的糖尿病患者表現(xiàn)為膀胱過(guò)度活動(dòng)癥,而在這些病例中又有48.0%的患者伴有尿失禁臨床癥狀。DCP的發(fā)病機(jī)制主要包括神經(jīng)病變、逼尿肌肌源性病變和氧化應(yīng)激損傷等,氧化應(yīng)激損傷是糖尿病膀胱功能損傷的重要因素,有效降低機(jī)體內(nèi)氧自由基的水平對(duì)保護(hù)糖尿病動(dòng)物模型的神經(jīng)及血管結(jié)構(gòu)功能十分有利。至今為止,針對(duì)DCP的藥物仍需要繼續(xù)探索,利用天然抗氧化劑治療DCP已逐漸被推崇為研究的新熱點(diǎn)。肌苷是臨床上多年廣為應(yīng)用、無(wú)明顯不良反應(yīng)的藥物,而且大量研究表明肌苷能有效對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷機(jī)體,提高細(xì)胞對(duì)缺氧、缺血的耐受力。Piezos離子通道是機(jī)械敏感性離子通道中的一種,其可感受細(xì)胞膜所受機(jī)械刺激的改變,立即作出反應(yīng),將細(xì)胞膜感受到的機(jī)械信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)或化學(xué)信號(hào)。在2010年,由Corey和Hudspeth等人研究發(fā)現(xiàn),在哺乳動(dòng)物中,該通道家族包含Piezo1和Piezo2蛋白,分別由FAM38A和FAM38B基因編碼。Piezos離子通道存在于許多組織中,如膀胱、腎臟及神經(jīng)等,并且研究發(fā)現(xiàn),Piezos基因及其表達(dá)的蛋白與機(jī)體一些病理生理過(guò)程相關(guān),如Dehydrated hereditary stomatocytosis(DHS)、Distal arthrogyposis type 5(DA5)、Gordon syndrome(GS)、Marden-Walker syndrome(MWS)等。目前,Piezos通道蛋白在DCP中表達(dá)情況,少有文獻(xiàn)報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)以鏈尿佐菌素(Streptozocin STZ)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,觀察糖尿病對(duì)大鼠膀胱組織Piezos離子通道的影響情況,并用肌苷進(jìn)行干預(yù)治療,分析肌苷對(duì)糖尿病大鼠膀胱組織中Piezos離子通道的保護(hù)作用,為DCP的藥物治療探索一個(gè)新的研究方向。第一部分肌苷治療DCP的形態(tài)學(xué)分析及相關(guān)氧化指標(biāo)測(cè)定目的:目前針對(duì)DCP的治療仍缺乏有效藥物,研究天然抗氧化劑已經(jīng)逐漸成為當(dāng)今的新熱點(diǎn)。本研究目的在于觀察肌苷對(duì)糖尿病大鼠膀胱的保護(hù)作用以及探索肌苷的抗氧化應(yīng)激機(jī)制。方法:將60只成年大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組,糖尿病組和糖尿病肌苷治療組,每組大鼠各20只,給予鏈脲佐菌素(60mg/kg)一次性腹腔注射以誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,1周后取尾靜脈血,測(cè)血糖水平≥16.7mmol/L達(dá)到造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。造模成功后肌苷治療組接受肌苷(75 mg/kg,ip,bid)治療,糖尿病組接受同量生理鹽水。肌苷治療干預(yù)4周、8周后,在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別從各組中取10只大鼠,取膀胱組織切片做蘇木精-伊紅(HE)染色、用免疫熒光法觀察膀胱組織中干細(xì)胞因子受體(c-kit)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve growth factor NGF)表達(dá)情況,電鏡下觀察各組大鼠膀胱組織的超顯微結(jié)構(gòu)。同時(shí)對(duì)大鼠膀胱組織進(jìn)行TUNEL凋亡分析,并測(cè)定膀胱組織中谷胱甘肽(Glutathione GSH)、丙二醛(Malondialdehyde MDA)以及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)的含量和活性。結(jié)果:糖尿病組大鼠膀胱組織HE染色提示黏膜顯著增生,肌束排列紊亂,結(jié)構(gòu)松散,肌束斷裂,肌束間間隙明顯增寬,肌細(xì)胞萎縮,淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),肌束間膠原纖維填充,血管增生充血,神經(jīng)束少見(jiàn);在電鏡下觀察,可見(jiàn)肌細(xì)胞排列紊亂,中間連接消失,肌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)線粒體空泡化顯著,核膜皺縮,核仁消失,染色質(zhì)不規(guī)則邊集,凝聚成塊;免疫熒光結(jié)果提示NGF和c-kit信號(hào)均較正常對(duì)照組減弱;TUNEL檢測(cè)顯示凋亡細(xì)胞比例顯著增多,MDA在8周時(shí)顯著增加,SOD,GSH則顯著減少。肌苷治療組大鼠膀胱組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)較糖尿病組顯著改善,NGF和c-kit信號(hào)顯著增強(qiáng),凋亡細(xì)胞比例顯著減少,且以上改善肌苷治療組在4周和8周時(shí)無(wú)顯著差別,8周時(shí)肌苷治療組膀胱組織中MDA含量較糖尿病組顯著減少。結(jié)論:氧化應(yīng)激在DCP的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用,肌苷能有效降低糖尿病大鼠膀胱組織中氧化應(yīng)激水平,減輕糖尿病大鼠膀胱組織的受損程度,保護(hù)膀胱的組織結(jié)構(gòu)和功能。第二部分肌苷對(duì)糖尿病大鼠膀胱組織piezos離子通道表達(dá)及分布的影響目的:觀察糖尿病大鼠膀胱組織內(nèi)piezos離子通道變化及肌苷(inosine)對(duì)糖尿病大鼠膀胱組織內(nèi)piezos離子通道的影響情況。方法:將54只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組),糖尿病對(duì)照組(DM組)和糖尿病肌苷治療組(Inosine組),每組18只大鼠,DM組和Inosine組大鼠分別給予鏈脲佐菌素(60mg/kg)一次性腹腔注射誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,1周后測(cè)血糖在16.7mmol/L以上,視為造模成功。造模成功后,Inosine組大鼠腹腔注射肌苷(75 mg/kg,ip,bid)治療,DM組接受同量生理鹽水。在肌苷治療1、2、8周后,各組分別取3只大鼠,用免疫熒光法觀察大鼠膀胱組織中c-kit、Piezo1表達(dá)情況。再取3只大鼠,用QPCR定量分析Piezo1和Piezo2基因表達(dá)水平,并通過(guò)Western blot對(duì)大鼠膀胱組織內(nèi)Piezo1和Piezo2蛋白表達(dá)水平分析比較。結(jié)果:在肌苷治療1、2周后,Inosine組Piezo1和Piezo2基因及蛋白表達(dá)水平與NC組無(wú)顯著差別(P0.05),DM組Piezo1和Piezo2基因及蛋白表達(dá)水平較NC組和Inosine組顯著增高(P0.05),在肌苷治療第8周后,NC組、DM組和Inosine組大鼠膀胱組織中Piezo1和Piezo2基因及蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差別(P0.05)。結(jié)論:DCP初期,大鼠膀胱組織中Piezo1和Piezo2基因肌蛋白表達(dá)水平可顯著增加,增強(qiáng)膀胱對(duì)機(jī)械刺激的敏感性,是產(chǎn)生尿頻癥狀的重要因素之一,而肌苷可顯著抑制Piezo1和Piezo2增加,從而保護(hù)膀胱功能。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2
【圖文】：

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文flow (e.g., kidneys, red blood cells), whereas Piezo2 is predominantly found in sensory tissues [e.g., dorsal root ganglia (DRG) sensory neurons and Merkel cells] that respond to touch(Figure 2). This distinct distribution pattern is apparently conserved in other species with multipleisoforms, as Piezo1 is found in erythrocytes and Piezo2 in Rohon Beard sensory neurons inzebrafish; Piezo2 expression has also been confirmed in sensory trigeminal ganglion neurons inthe star-nosed mole and birds (with a particular enrichment of Piezo2-expressing neurons intactile foraging waterfowl) [6,9 12]. The single Drosophila isoform is found both in sensorytissues (including Type I ciliated and Type II multidendritic sensory neurons) and in nonsensorytissues (including hindgut, aorta, and trachea), suggesting that Piezos may be less specialized inlower organisms [2]. In addition, a few cell types express both Piezo1 and Piezo2, raising thepossibility that they could form heteromeric channels with potentially distinct functions [13]. The12PressureKeratinocytesNeural morphologyNeural progenitor cellNeuronPiezo1 in Smooth Muscle Cells Is Hypertension-Dependent Arterial Graphical AbstractAutKeviArhaPate

-46-圖 6 在第 1、2、8 周時(shí)，利用免疫熒光雙標(biāo)法標(biāo)記 NC 組、DM 組和 inosine 組大鼠膀胱組織中 Piezo1(紅色)和 c-kit（綠色）的表達(dá)情況。第 1、2 周時(shí)，與 NC 組和 Inosine 組相比較，DM 組紅色信號(hào)較強(qiáng)；與 NC 組比較，Inosine 組熒光信號(hào)無(wú)顯著差別，第 8 周時(shí)各組紅色信號(hào)強(qiáng)度無(wú)顯著差異。綠色熒光信號(hào)在第 1周時(shí)各組無(wú)顯著差異，第 2、8 周時(shí)，與 NC 組和 Inosine 組相比較，DM 組較弱；與 NC 組相比，Inosine 組綠色熒光信號(hào)較弱，NC 組綠色熒光信號(hào)最強(qiáng)。標(biāo)尺 20μm。U： 尿路上皮；D：逼尿肌， ↑ICCS

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文3.2 QRT-PCR 檢測(cè)結(jié)果分析與 NC 組和 Inosine 組相比，DM 組大鼠膀胱中 Piezo1 和 Piezo2 在第 1、2 周mRNA 表達(dá)水平明顯增強(qiáng)（P<0.05）甚至在第一周時(shí) Piezo1 表達(dá)水平更加顯著（P<0.01），Inosine 組和 NC 組中 Piezo1 和 Piezo2 表達(dá)水平在第 1、2 周無(wú)明顯差異(P>0.05)，第 8 周時(shí) NC 組、DM 組和 Inosine 組中 Piezo1 和 Piezo2 表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。（圖 7）

【參考文獻(xiàn)】

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1 李娟;林宏城;任東林;;Piezos機(jī)械敏感性離子通道在直腸中的表達(dá)[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年21期

2 孫曉萌;朱瀅;王云;鞏堯瑤;林琳;;氧化應(yīng)激在糖尿病胃腸動(dòng)力障礙中的作用[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2014年11期

3 康婷;黃世友;李鵬;史婷;余擎;段銀鐘;;Piezos離子通道在大鼠牙周組織中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2014年05期

4 劉偉;梁曉春;孫青;王普燕;趙麗;黃文智;李伯武;;筋脈通對(duì)糖尿病大鼠背根神經(jīng)節(jié)氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2013年06期

5 賈彩霞;王元松;田鳳勝;;神經(jīng)生長(zhǎng)因子與糖尿病神經(jīng)病變的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年19期

6 魯雄兵;何朝輝;曹石金;曾國(guó)華;李遜;;糖尿病大鼠膀胱細(xì)胞凋亡的改變[J];廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年06期

7 雙衛(wèi)兵;王東文;高宏飛;原小斌;;自由基在2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌損傷的作用與意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年19期

8 張冬梅;魏素文;段好剛;魏玉輝;李波霞;武琴園;武新安;;鏈脲佐菌素誘導(dǎo)制備糖尿病大鼠模型方法學(xué)考察[J];蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

9 紀(jì)世琪;丁國(guó)富;王勤章;;糖尿病性膀胱病研究進(jìn)展[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年03期

10 楊金晶;楊秋萍;;鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病動(dòng)物模型的體會(huì)[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年S1期

本文編號(hào)：2786845