【摘要】：目的:為了初步闡明TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路及其信號(hào)分子在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)發(fā)生與發(fā)展中的作用與機(jī)制。方法:按照SLEDAI評(píng)分,將38例SLE患者分為非活動(dòng)期組(21例)、活動(dòng)期組(17例)。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)兩組SLE患者及19例健康對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中Toll樣受體9(TLR9)、接頭蛋白髓系分化蛋白88(MyD88)、腫瘤壞死因子相關(guān)受體因子6(TRAF6)、干擾素調(diào)節(jié)因子5(IRF5)mRNA表達(dá)水平,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)上述兩組SLE患者及19例健康對(duì)照血清中干擾素α(IFN-α)及白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素10(IL-10)的水平。采用免疫磁珠分離法分離4例SLE患者及4例健康對(duì)照外周血B淋巴細(xì)胞,培養(yǎng)3天后傳代,將細(xì)胞懸液平均分到兩個(gè)孔中,分別標(biāo)記阻滯劑干預(yù)組及空白對(duì)照組。在阻滯劑干預(yù)組中加入TLR9阻滯劑,空白對(duì)照組中加入TLR9阻滯劑的空白對(duì)照制劑。繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),采用RT-qPCR檢測(cè)兩組B細(xì)胞上TLR9、MyD88、TRAF6、IRF5mRNA相對(duì)表達(dá)量,并使用ELISA法檢測(cè)兩組培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10的水平。結(jié)果:1.外周血PBMC中TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路各信號(hào)分子的表達(dá)(1)外周血PBMC中,TLR9、TRAF6、IRF5表達(dá)量在活動(dòng)期組均較非活動(dòng)期組、健康對(duì)照組高,非活動(dòng)期組均較健康對(duì)照組高,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。非活動(dòng)期組MyD88表達(dá)量較健康對(duì)照組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),活動(dòng)期組MyD88表達(dá)量較健康對(duì)照組高,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。SLE活動(dòng)期組血清中IL-6、IL-10表達(dá)量均較非活動(dòng)期組、健康對(duì)照組高,非活動(dòng)期組均較健康對(duì)照組高,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05);SLE活動(dòng)期組血清中IFN-α表達(dá)量均較非活動(dòng)期組及健康對(duì)照組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),非活動(dòng)期組與健康對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.5)。(2)TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路中各信號(hào)分子與SLE部分活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性分析SLE患者組PBMC中TLR9的表達(dá)量與MyD88、TRAF6、IRF5、IFN-α、IL-6、IL-10、dsDNA、SLEDAI均呈正相關(guān),與補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4的表達(dá)量均呈負(fù)相關(guān),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。MyD88與TRAF6、IRF5、IFN-α、IL-6、IL-10、SLEDAI、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、dsDNA均無(wú)相關(guān)性(均p0.05)。TRAF6與IRF5、IFN-α、SLEDAI、ds DNA均呈正相關(guān),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05);與IL-6、IL-10、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4均無(wú)相關(guān)性,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。IRF5與IFN-α、IL-6、IL-10、SLEDAI、dsDNA均呈正相關(guān),與補(bǔ)體C3呈負(fù)相關(guān),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05);與補(bǔ)體C4無(wú)相關(guān),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(3)TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路中各信號(hào)分子與SLE相關(guān)臨床表現(xiàn)的統(tǒng)計(jì)分析SLE患者組中,TLR9、TRAF6、IRF5的表達(dá)量在合并有關(guān)節(jié)炎患者較無(wú)合并關(guān)節(jié)炎患者高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。而MyD88的表達(dá)量在合并關(guān)節(jié)炎患者較無(wú)合并關(guān)節(jié)炎患者低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。TLR9、TRAF6、IRF5的表達(dá)量在有面部紅斑的患者與無(wú)面部紅斑的患者間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05),MyD88的表達(dá)量在有面部紅斑的患者較無(wú)面部紅斑的患者低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.TLR9阻滯劑對(duì)體外培養(yǎng)的外周血B淋巴細(xì)胞上TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路各信號(hào)分子及下游因子的影響(1)磁珠分離外周血B淋巴細(xì)胞后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)B細(xì)胞純度大于95%。(2)體外培養(yǎng)外周血B淋巴細(xì)胞中,SLE患者組TLR9、MyD88、TRAF6、IRF5表達(dá)量均較健康對(duì)照組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。(3)體外培養(yǎng)外周血B淋巴細(xì)胞中,TLR9阻滯劑干預(yù)組中TLR9、MyD88、TRAF6、IRF5的表達(dá)量均較空白對(duì)照組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。對(duì)于同一信號(hào)分子,其在健康對(duì)照組中的空白對(duì)照的表達(dá)量與TLR9阻滯劑干預(yù)后的表達(dá)量之間的差值均較SLE組的差值大,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。(4)SLE患者B細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10的表達(dá)量較健康對(duì)照組低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于同一信號(hào)分子,其在健康對(duì)照組中的空白對(duì)照的表達(dá)量與TLR9阻滯劑干預(yù)后的表達(dá)量之間的差值均較SLE組的差值大,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.05)。結(jié)論:1.TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路可能與SLE的發(fā)病及疾病活動(dòng)具有相關(guān)性,該通路信號(hào)分子的表達(dá)水平有可能成為疾病活動(dòng)的判斷指標(biāo);2.SLE患者B淋巴細(xì)胞上TLR9-MyD88-TRAF6-IRF5信號(hào)通路可能存在異常耐受。
【圖文】：

活動(dòng)期組 2.48±0.62 0.64±0.68 1.43±0.31 1.67±0.84健康對(duì)照組 0.70±0.324 0.46±0.33 0.51±0.31 0.60±0.39圖1 在外周血PBMC中，TLR9、MyD88、TRAF6、IRF5的表達(dá)情況

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本文編號(hào)：2699941