【摘要】：目的:1.研究鋅α2糖蛋白(zinc-alpha2-glycoprotein,ZAG)對胰島素抵抗HepG2細胞中p-AktSer473、GLUT4表達的影響;2.研究ZAG對胰島素抵抗HepG2細胞中mTOR、Atg7及LC3-II表達的影響;3.探討ZAG對胰島素信號轉(zhuǎn)導的影響是否與自噬相關(guān)。方法:綜合文獻所述~([1-3]),誘導胰島素抵抗HepG2細胞模型。實驗分為對照組(Control組)、胰島素抵抗組(IR組)、ZAG組、ZAG+氯喹組(ZAG+CQ組),其中Control組用含10%胎牛血清(fetal bovine,FBS)的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng),其余3組用含10~(㧟5)mol/L胰島素、10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng),由此誘導細胞發(fā)生胰島素抵抗。細胞發(fā)生胰島素抵抗24h后,ZAG組添加濃度為25μg/mL的ZAG,ZAG+CQ組同時添加濃度為25μg/L的ZAG和濃度為50μmol/L的氯喹(chloroguine,CQ),繼續(xù)培養(yǎng)24h。檢測ZAG加入前后各組細胞培養(yǎng)液上清葡萄糖含量,并計算葡萄糖消耗量;實驗結(jié)束后,提取各組細胞蛋白,用Western blot的方法檢測各組細胞p-AktSer473、GLUT4、mTOR、Atg7及LC3-Ⅱ蛋白的表達,并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1.與Control組相比,IR組細胞p-AktSer473、GLUT4蛋白表達明顯減少(P0.05);與IR組相比,ZAG組細胞p-AktSer473、GLUT4蛋白表達顯著增加(P0.05);與ZAG組相比,ZAG+CQ組細胞p-AktSer473、GLUT4蛋白表達明顯減少(P0.05)。2.與Control組相比,IR組細胞mTOR蛋白表達顯著增加(P0.05),Atg7、LC3-Ⅱ蛋白表達明顯減少(P0.05);與IR組相比,ZAG組細胞mTOR蛋白表達減少(P0.05),Atg7、LC3-Ⅱ蛋白表達增加顯著(P0.05);與ZAG組相比,ZAG+CQ組細胞mTOR表達增加,但無明顯差異(P=0.550),Atg7蛋白表達明顯減少(P0.05),LC3-II蛋白表達減少,但差異不顯著(P=0.055)。結(jié)論:1.ZAG可以改善胰島素抵抗HepG2細胞中受損的胰島素信號通路,增加葡萄糖攝取,從而減輕胰島素抵抗。2.ZAG能夠提高胰島素抵抗HepG2細胞的自噬水平。3.抑制自噬,會減弱ZAG增強胰島素信號轉(zhuǎn)導、減輕胰島素抵抗的作用,加重HepG2細胞胰島素抵抗。4.ZAG能通過多種機制減輕肝臟胰島素抵抗,其增加自噬活性、增強胰島素信號轉(zhuǎn)導可能是其改善胰島素抵抗的分子機制之一。5.ZAG增加胰島素抵抗HepG2細胞胰島素信號的轉(zhuǎn)導,可能與其增強自噬活性增加有關(guān)。
【圖文】：

濃度胰島素對 HepG2 細胞的影響同胰島素濃度對 HepG2 細胞葡萄糖消耗量的影響含不同胰島素濃度的培養(yǎng)液作用 36h 后各組細胞葡萄糖消耗量（ x±s，（mol/L） 葡萄糖消耗量（mmol/L） F 5.7991±0.2891 152.683 㧟41.3785±0.2962*㧟53.4253±0.2375*㧟63.5861±0.2872*㧟74.4675±0.3216*㧟85.7009±0.1310注：與對照組相比，*P＜0.05。

含不同胰島素濃度的培養(yǎng)液作用 36h 后各組細胞生存率改變（ x±s，濃度（mol/L） 490nm 生存率 570nm 生0 1.0000±0.0000 1.0000±10㧟40.0357±0.0029* 0.0229±010㧟50.9168±0.0928 0.8954±10㧟60.8818±0.1034 0.7869±10㧟71.0335±0.1048 0.9539±10㧟81.0835±0.1385 0.9310± 215.197 16.5P0.010 0.0注：與對照組相比，*P＜0.05。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1

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本文編號：2685363