【摘要】：目的:1.研究鋅α2糖蛋白(zinc-alpha2-glycoprotein,ZAG)對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中p-AktSer473、GLUT4表達(dá)的影響;2.研究ZAG對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中mTOR、Atg7及LC3-II表達(dá)的影響;3.探討ZAG對胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響是否與自噬相關(guān)。方法:綜合文獻(xiàn)所述~([1-3]),誘導(dǎo)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型。實驗分為對照組(Control組)、胰島素抵抗組(IR組)、ZAG組、ZAG+氯喹組(ZAG+CQ組),其中Control組用含10%胎牛血清(fetal bovine,FBS)的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng),其余3組用含10~(㧟5)mol/L胰島素、10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng),由此誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗。細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗24h后,ZAG組添加濃度為25μg/mL的ZAG,ZAG+CQ組同時添加濃度為25μg/L的ZAG和濃度為50μmol/L的氯喹(chloroguine,CQ),繼續(xù)培養(yǎng)24h。檢測ZAG加入前后各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清葡萄糖含量,并計算葡萄糖消耗量;實驗結(jié)束后,提取各組細(xì)胞蛋白,用Western blot的方法檢測各組細(xì)胞p-AktSer473、GLUT4、mTOR、Atg7及LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá),并進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1.與Control組相比,IR組細(xì)胞p-AktSer473、GLUT4蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05);與IR組相比,ZAG組細(xì)胞p-AktSer473、GLUT4蛋白表達(dá)顯著增加(P0.05);與ZAG組相比,ZAG+CQ組細(xì)胞p-AktSer473、GLUT4蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05)。2.與Control組相比,IR組細(xì)胞mTOR蛋白表達(dá)顯著增加(P0.05),Atg7、LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05);與IR組相比,ZAG組細(xì)胞mTOR蛋白表達(dá)減少(P0.05),Atg7、LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)增加顯著(P0.05);與ZAG組相比,ZAG+CQ組細(xì)胞mTOR表達(dá)增加,但無明顯差異(P=0.550),Atg7蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05),LC3-II蛋白表達(dá)減少,但差異不顯著(P=0.055)。結(jié)論:1.ZAG可以改善胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中受損的胰島素信號通路,增加葡萄糖攝取,從而減輕胰島素抵抗。2.ZAG能夠提高胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的自噬水平。3.抑制自噬,會減弱ZAG增強(qiáng)胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、減輕胰島素抵抗的作用,加重HepG2細(xì)胞胰島素抵抗。4.ZAG能通過多種機(jī)制減輕肝臟胰島素抵抗,其增加自噬活性、增強(qiáng)胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可能是其改善胰島素抵抗的分子機(jī)制之一。5.ZAG增加胰島素抵抗HepG2細(xì)胞胰島素信號的轉(zhuǎn)導(dǎo),可能與其增強(qiáng)自噬活性增加有關(guān)。
【圖文】：

濃度胰島素對 HepG2 細(xì)胞的影響同胰島素濃度對 HepG2 細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響含不同胰島素濃度的培養(yǎng)液作用 36h 后各組細(xì)胞葡萄糖消耗量（ x±s，（mol/L） 葡萄糖消耗量（mmol/L） F 5.7991±0.2891 152.683 㧟41.3785±0.2962*㧟53.4253±0.2375*㧟63.5861±0.2872*㧟74.4675±0.3216*㧟85.7009±0.1310注：與對照組相比，*P＜0.05。

含不同胰島素濃度的培養(yǎng)液作用 36h 后各組細(xì)胞生存率改變（ x±s，濃度（mol/L） 490nm 生存率 570nm 生0 1.0000±0.0000 1.0000±10㧟40.0357±0.0029* 0.0229±010㧟50.9168±0.0928 0.8954±10㧟60.8818±0.1034 0.7869±10㧟71.0335±0.1048 0.9539±10㧟81.0835±0.1385 0.9310± 215.197 16.5P0.010 0.0注：與對照組相比，*P＜0.05。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1

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本文編號：2685363