【摘要】：國際糖尿病聯(lián)盟數(shù)據(jù)顯示,目前世界上有4.25億糖尿病患者,預計到2045年這個數(shù)值將上升到6.29億,其中中國患者占1.14億。Ⅱ型糖尿病占糖尿病總數(shù)的90%左右。Ⅱ型糖尿病的兩個主要致病因素是胰島素抵抗和后期胰島β細胞衰竭。B族維生素在治療Ⅱ型糖尿病及其并發(fā)癥都有改善,但其治療機制尚不清楚。本文構建RIN-葡萄糖依賴性腸促胰島素受體(GIPR)細胞模型,用于檢測B族維生素對GIPR激活引起細胞中GIPR內(nèi)吞,并利用細胞免疫熒光技術和western blot檢測B族維生素評價胰島β細胞自噬。研究結果如下:1.將質(zhì)粒pCMV6-AC-GIPR/GFP轉染至RIN-m5F細胞中,通過G418的篩選獲得單克隆細胞株,該細胞通過多次傳代都能穩(wěn)定遺傳。在熒光顯微鏡下可以看到綠色熒光分布均勻。用(D-Ala~2)GIP作用20min時細胞內(nèi)出現(xiàn)熒光斑點,表明GIPR激動劑類藥物的篩選模型構建成功。將該模型應用于評價B族維生素,結果顯示在B族維生素(1×10~(-5)mol/L、1×10~(-6)mol/L、1×10~(-7)mol/L)作用于細胞后,都沒有出現(xiàn)熒光斑點激活模型,而用(D-Ala~2)GIP作用于細胞在20min和40min都出現(xiàn)了熒光斑點。表明B族維生素沒有激活GIP受體引起細胞內(nèi)吞。2將B族維生素(每種設4個濃度梯度)處理后,通過細胞免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)VitaminB1作用下的細胞自噬體沒有增加,而在VitaminB2、VitaminB3、VitaminB5、VitaminB6、VitaminB7、VitaminB9、VitaminB12作用下細胞自噬點明顯增加。用western blot檢測自噬相關蛋白,發(fā)現(xiàn)VitaminB2、VitaminB3、VitaminB5、VitaminB6、VitaminB7、VitaminB9、VitaminB12處理后的RIN-m5F細胞,其LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值上調(diào),P62蛋白水平下降,AMPK磷酸化水平上升,mTOR磷酸化不變,說明這7種維生素都是通過AMPK途徑誘導胰島β細胞自噬。
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1

【參考文獻】

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1 李敬華;張紅;候雯莉;;腸促胰島素生理作用及應用研究進展[J];武警醫(yī)學院學報;2011年07期

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本文編號：2660084