【摘要】：研究背景強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種主要侵犯患者脊柱和骶髂關(guān)節(jié)的慢性自身免疫性炎癥疾病。AS的病因尚未明確,至今尚無有效的根治辦法。有研究表明AS的發(fā)病是遺傳和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果,其中腸道菌群失調(diào)在該疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)抗TNF-α類生物制劑對AS具有較好的療效,但仍有部分患者應(yīng)用TNF-α抑制劑治療后效果不佳或無效。關(guān)于TNF-α抑制劑治療AS的確切機(jī)制目前仍不甚明確。有研究表明TNF-α抑制劑的治療可以改變炎癥性腸病宿主的腸道菌群,同時沉默TNF可以延緩因年齡增長而改變的小鼠腸道菌群改變。那么,TNF-α抑制劑對AS的治療效果是否與改變宿主腸道菌群和腸道通透性有關(guān)?目前仍不清楚。研究目的建立蛋白聚糖誘導(dǎo)的AS模型小鼠明確TNF-α抑制劑的治療作用;分析抗TNF-α治療后AS小鼠腸道菌群變化;闡明TNF-α抑制劑的作用機(jī)制與腸道菌群的關(guān)系,為臨床合理選擇和應(yīng)用TNF-α抑制劑治療AS提供理論依據(jù)。研究方法30只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為對照組,模型組,治療組。牛源軟骨蛋白聚糖和佐劑制成混懸液腹腔注射構(gòu)建AS模型小鼠。治療組于誘導(dǎo)后的第10周開始給予益賽普(rhTNFR:Fc)連續(xù)腹腔注射4周,對照組與模型組給予等體積的生理鹽水注射。FITC-葡聚糖法檢測各組小鼠腸道通透性;小鼠踝關(guān)節(jié)進(jìn)行蘇木精伊紅(HE)染色;ELISA檢測小鼠血液中IL-17A和TNF-a的濃度;對小鼠的回腸組織進(jìn)行HE染色;同時運(yùn)用免疫組化、Western blot分析小鼠腸道上皮緊密連接蛋白ZO-1和Occludin的表達(dá)情況;16S rDNA高通量測序分析各組小鼠腸道菌群構(gòu)成。研究結(jié)果1.TNF-α抑制劑有效降低模型組小鼠關(guān)節(jié)發(fā)病率和關(guān)節(jié)評分及體重丟失,踝關(guān)節(jié)HE結(jié)果顯示模型組小鼠出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤,滑膜增生。但在治療組中僅出現(xiàn)少量的細(xì)胞浸潤。ELISA結(jié)果提示治療后模型小鼠血清的IL-17A和TNF-α水平顯著下降。2.模型組小鼠的腸道絨毛紊亂,結(jié)構(gòu)破壞,甚至從基底部分離。治療組小鼠僅表現(xiàn)出輕微的腸道粘膜損傷。血清FITC-葡聚糖發(fā)現(xiàn)TNF-α抑制劑可以降低模型小鼠的腸道通透性,同時提高腸道上皮緊密連接蛋白ZO-1和Occludin的表達(dá)。3.AS模型小鼠的腸道菌群與對照組比較存在明顯的差異,提示模型小鼠存在腸道菌群紊亂的現(xiàn)象。與對照組相比,模型組AS小鼠腸道菌群在門水平上擬桿菌門顯著降低,厚壁菌門顯著升高。經(jīng)TNF-α抑制劑治療后治療組小鼠的腸道菌群中擬桿菌門升高,厚壁菌門降低,與對照組相似。KEGG功能預(yù)測分析顯示模型組小鼠以細(xì)胞遷移,膜轉(zhuǎn)運(yùn)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基因為特征,而治療組小鼠以核苷酸代謝,信號分子交互的基因為特征。研究結(jié)論TNF-α抑制劑對AS小鼠的治療作用與改善AS腸道菌群紊亂及促進(jìn)宿主腸道屏障功能的恢復(fù)有關(guān)。
【圖文】：

邐ｗｅｅｋｓ逡逑圖２－１：邋ＴＮＦ－ａ抑制劑治療延緩強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病。逡逑圖２－１Ａ：治療方案；圖２－１Ｂ：關(guān)節(jié)炎發(fā)病率；圖２－１Ｃ：關(guān)節(jié)炎評分（＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１）；逡逑圖２－１Ｄ：體重變化。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１邋：ＲｈＴＮＦＲ：邋Ｆｃ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｇｒｅｓｓ邋ａｎｄ邋ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ邋ｌｏｓｓ邋ｏｆ邋ＰＧ－ｉｎｄｕｃｅｄ逡逑ｍｉｃｅ．邋（Ａ）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ邋ｓｃｈｅｄｕｌｅ．邋（Ｂ）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ邋ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ．邋（Ｃ）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ邋ｓｃｏｒｅ邋（ＰＧ邋ｇｒｏｕｐ邋ｖｓ逡逑ｒｈＴＮＦＲ：Ｆｃ邋ｇｒｏｕｐ邋＊邋ｐ＜０．０５，邋＊＊邋ｐ＜０．０１）．邋（Ｄ）Ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｔｈｒｅｅ邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑（ｎ＝１０／ｇｒｏｕｐ）邋ｗｅｒｅ邋ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．逡逑２．３．２踝關(guān)節(jié)ＨＥ染色結(jié)果逡逑ＨＥ染色結(jié)果顯示相對健康對照組小鼠，模型組小鼠的踝關(guān)節(jié)染色有較多逡逑炎癥細(xì)胞浸潤，滑膜多量增生，關(guān)節(jié)軟骨破壞以及出現(xiàn)了骨侵蝕（圖２－２Ｂ）。ＴＮＦ－ａ逡逑抑制劑治療后，小鼠的踝關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞浸潤程度明顯降低，出現(xiàn)了輕微的關(guān)節(jié)逡逑間隙變窄

邐模型組（Ｂ）邐治療組（Ｃ）逡逑圖３－２：回腸ＨＥ染色（４００Ｘ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－２：邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｍｉｃｅ邋ｓｈｏｗｉｎｇ邋ｓｍｏｏｔｈ邋ｖｉｌｌｉ邋ａｎｄ邋ｎｏｒｍａｌ邋ｇｌａｎｄｓ，邋ＰＧ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｍｉｃｅ邋ｓｈｏｗｉｎｇ逡逑ｄｉｓｏｒｇａｎｉｚｅｄ邋ｖｉｌｌｕｓ邋ａｎｄ邋ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ邋ｖｉｌｌｏｕｓ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ａｎｄ邋ｒｈＴＮＦＲ：Ｆｃ邋ｍｉｃｅ邋ｓｈｏｗｉｎｇ邋ｍｉｌｄ邋ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ逡逑ｏｆｖｉｌｌｉ逡逑３．３．３回腸免疫組化逡逑三組小鼠回腸組織的ＺＯ－１和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的免疫組化結(jié)果如圖３－３，絨毛上皮逡逑細(xì)胞之間的目標(biāo)蛋白為棕黃色。從結(jié)果來看，ＺＯ－１和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ蛋白在對照組小逡逑鼠的腸道絨毛上皮之間棕黃色顏色較深，，在模型組小鼠中顏色比較淺，而經(jīng)過逡逑ＴＮＦ－ａ抑制劑治療的治療組小鼠的顏色得到一定程度的恢復(fù)，說明治療后回腸逡逑的緊密連接蛋白表達(dá)量得到恢復(fù)，對Ｚ０－１和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ蛋白的定量研究見下。逡逑－｜｜幽＿逡逑。－W灥＿逡逑對照組（Ａ）邐模型組（Ｂ）邐治療組（Ｃ）逡逑圖３－３：回腸組織的Ｚ０－１和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ免疫組化。Ｚ０－１和ｏｃｃｌｕｄｉｎ陽性蛋白呈棕色，顏色的逡逑３０逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R593.23

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 秦松林;李衛(wèi)勇;沈賢發(fā);李榮良;;從“腎”論治強(qiáng)直性脊柱炎[J];中國民族民間醫(yī)藥;2019年13期

2 李艷君;;挑戰(zhàn)強(qiáng)直性脊柱炎貴在“早”[J];榆林科技;2006年04期

3 趙琳;張曉莉;王曉非;;強(qiáng)直性脊柱炎與牙周炎相關(guān)性研究[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;2017年09期

4 徐桂清;姜楊;張善強(qiáng);沈雷;高音;;一例強(qiáng)直性脊柱炎實(shí)體標(biāo)本的制作體會[J];解剖學(xué)雜志;2017年03期

5 楊文浩;舒榮;韓依軒;袁偉;于萍;李娜;劉白鷺;崔劉福;王燕云;宋海澄;;自然殺傷T細(xì)胞在強(qiáng)直性脊柱炎中的水平及臨床意義[J];廣西醫(yī)學(xué);2018年10期

6 吳瑞娜;王萍;馮福海;;馮福海教授治療強(qiáng)直性脊柱炎(肝腎虧虛型)臨床探析[J];中醫(yī)臨床研究;2018年22期

7 王利新;;自我管理干預(yù)在強(qiáng)直性脊柱炎患者中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J];武警后勤學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2018年04期

8 武明慧;;強(qiáng)直性脊柱炎患者應(yīng)用護(hù)理的效果研究[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2016年75期

9 張風(fēng)肖;趙陽;寧曉然;李芳;鄭桂敏;閆永龍;于織波;;強(qiáng)直性脊柱炎伴髖關(guān)節(jié)病變患者的臨床特征分析[J];中華全科醫(yī)學(xué);2017年02期

10 張璐;劉云;馬東紅;許清玉;郭明好;;中西醫(yī)結(jié)合治療強(qiáng)直性脊柱炎臨床療效[J];陜西中醫(yī);2017年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 馬學(xué)華;張娜;趙宇;宋麗婷;;強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測的意義[A];首屆中國臨床微生物學(xué)大會（寧波會議）暨《醫(yī)學(xué)參考報》微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2010年

2 俞鐘明;王鑫;孫佳穎;;65例強(qiáng)直性脊柱炎的臨床分析[A];2016年浙江省風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會暨風(fēng)濕免疫病診療進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2016年

3 蘇勵;;強(qiáng)直性脊柱炎中西醫(yī)結(jié)合治療[A];江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會風(fēng)濕病專業(yè)委員會成立第一屆學(xué)術(shù)會議暨第三屆風(fēng)濕病診治學(xué)習(xí)班講義[C];2015年

4 蔣黎純;;強(qiáng)直性脊柱炎與疤痕疙瘩[A];二零一四年浙江省風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2014年

5 許冠華;林進(jìn);;康復(fù)訓(xùn)練對強(qiáng)直性脊柱炎患者關(guān)節(jié)功能的影響[A];二零一四年浙江省風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2014年

6 高根德;;強(qiáng)直性脊柱炎研究進(jìn)展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會學(xué)術(shù)年會——創(chuàng)新優(yōu)秀論文集[C];2002年

7 王隨修;王俊杰;章瑞鋒;趙禮恒;王初元;;強(qiáng)直性脊柱炎的急癥控制與畸形矯正[A];第十二屆全國中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)術(shù)研討會專輯[C];2008年

8 李亞;;輔灸配合中藥內(nèi)服治療強(qiáng)直性脊柱炎[A];第十二屆全國中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)術(shù)研討會專輯[C];2008年

9 李莛岐;;強(qiáng)直性脊柱炎診療相關(guān)問題探討[A];第十二屆全國中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)術(shù)研討會專輯[C];2008年

10 李滿意;劉紅艷;楊林江;沈芳芳;;強(qiáng)直性脊柱炎男女臨床特點(diǎn)對比——附178例報告[A];第十二屆全國中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)術(shù)研討會專輯[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 王泳;“強(qiáng)直性脊柱炎健康扶貧工程”試點(diǎn)啟動[N];人民政協(xié)報;2019年

2 四川大學(xué)華西醫(yī)院風(fēng)濕免疫科主任醫(yī)師 劉鋼;強(qiáng)直性脊柱炎 全方位治療是關(guān)鍵[N];健康報;2017年

3 本報記者 閻紅;強(qiáng)直性脊柱炎公益項目鼓勵患者“永不言棄”[N];健康報;2018年

4 上海光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院主任醫(yī)師 岳濤;強(qiáng)直性脊柱炎：關(guān)節(jié)內(nèi)外都有文章[N];健康報;2017年

5 中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會副主任委員、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院副院長、風(fēng)濕免疫科主任、主任醫(yī)師、教授、博士生導(dǎo)師 張志毅;不可小覷的強(qiáng)直性脊柱炎[N];中國醫(yī)藥報;2017年

6 本報記者 王天鵝;強(qiáng)直性脊柱炎：按慢病管理 扭轉(zhuǎn)被動局面[N];健康報;2017年

7 北京積水潭醫(yī)院風(fēng)濕免疫科主任 宋慧;雙管齊下控制強(qiáng)直性脊柱炎[N];健康報;2016年

8 本報記者 王智錦 通訊員 王海芳 王鵬;彎腰駝背可能是強(qiáng)直性脊柱炎[N];廣東科技報;2016年

9 本報記者 顧泳;強(qiáng)直性脊柱炎，怎么治最有效[N];解放日報;2014年

10 解放軍總醫(yī)院風(fēng)濕科副主任 朱劍;強(qiáng)直性脊柱炎應(yīng)該早診早治[N];健康報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 童文文;Kaiso抗體在強(qiáng)直性脊柱炎病人血液中的差異表達(dá)及其對骨化進(jìn)程的作用及機(jī)制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

2 邱冬妮;補(bǔ)腎強(qiáng)督治僂方調(diào)節(jié)強(qiáng)直性脊柱炎骨代謝的臨床與機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年

3 周晨;一、強(qiáng)直性脊柱炎患者腸道菌群特征的宏基因組學(xué)研究 二、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中CD4+ T淋巴細(xì)胞亞群TCRβ文庫特征研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

4 楊帆;應(yīng)用高通量技術(shù)進(jìn)行長壽和強(qiáng)直性脊柱炎關(guān)聯(lián)基因的篩查研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

5 徐仲陽;強(qiáng)直性脊柱炎致病相關(guān)基因的篩選及RUNX1參與破骨細(xì)胞分化的可能機(jī)制[D];山東大學(xué);2018年

6 朱俸漣;針刀聯(lián)合撥針療法治療強(qiáng)直性脊柱炎患者的臨床觀察[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2018年

7 葉敏發(fā)（Michael Yeh）;國醫(yī)大師周仲瑛教授辨治強(qiáng)直性脊柱炎經(jīng)驗與臨床運(yùn)用[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2018年

8 王建明;補(bǔ)腎強(qiáng)督方治療強(qiáng)直性脊柱炎患者的臨床研究及機(jī)制探討[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

9 劉_g;強(qiáng)直性脊柱炎早期診斷的臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

10 陳蕊雯;中國漢族人群強(qiáng)直性脊柱炎候選基因的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 任婧;阿達(dá)木單抗治療強(qiáng)直性脊柱炎的臨床療效分析[D];山東大學(xué);2019年

2 林玉萍;艾拉莫德治療強(qiáng)直性脊柱炎的初步觀察[D];福建醫(yī)科大學(xué);2018年

3 康國榮;TNF-α抑制劑治療強(qiáng)直性脊柱炎患者減量方案研究及中斷后再次啟用的療效觀察[D];蘭州大學(xué);2019年

4 豐帆;強(qiáng)直性脊柱炎患者血清來源外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

5 胡勇;活動期強(qiáng)直性脊柱炎增加全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)手術(shù)失血量[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

6 石柳;強(qiáng)直性脊柱炎患者血清TNF-α和IL-6水平變化及意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

7 王欣榮;強(qiáng)直性脊柱炎患者新骨形成危險因素分析及其與14-3-3η抗體相關(guān)性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

8 袁亞萍;G-蛋白偶聯(lián)受體65基因SNPs與中國漢族人群強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

9 陳夢雅;干擾素調(diào)節(jié)因子8（IRF8）基因啟動子甲基化水平與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

10 劉斌;TNF-α抑制劑調(diào)節(jié)強(qiáng)直性脊柱炎小鼠腸道菌群及其作用機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2659700