【摘要】：背景:老年性骨質(zhì)疏松癥和老年性肥胖是我國日益加劇的老齡化現(xiàn)狀所面臨的兩大挑戰(zhàn)。隨著衰老,骨髓微環(huán)境中的成骨細(xì)胞逐漸減少,而脂肪細(xì)胞逐漸增多,這樣導(dǎo)致骨合成減少,骨丟失增多,引起老年性骨質(zhì)疏松。不同于傳統(tǒng)觀點(diǎn),老年性骨質(zhì)疏松癥和肥胖現(xiàn)被認(rèn)為在發(fā)病機(jī)制上存在諸多相關(guān)性,但具體機(jī)制不明。鑒定出參與脂肪-骨網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的新因子不僅可拓寬我們對(duì)老年性疾病的認(rèn)識(shí),而且可以給開發(fā)新的治療藥物提供更多的研究依據(jù)。Osteoglycin(OGN)是細(xì)胞外基質(zhì)的重要部分,逐漸成為心血管疾病、炎癥的潛在生物標(biāo)志物。OGN雖然在脂肪和骨中均有表達(dá),尤其以脂肪高表達(dá)為主,但其相關(guān)功能尚未被研究。目的:本研究旨在細(xì)胞水平上通過高表達(dá)OGN來探討其在骨間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的成脂分化和成骨分化平衡中的調(diào)控作用,以及OGN通過降低Pparγ2的表達(dá)起到抵抗老年性骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的作用。方法:首先在小鼠MSCs細(xì)胞株中觀察成脂或成骨誘導(dǎo)時(shí)OGN和Pparγ2的表達(dá)趨勢(shì),并分析正常小鼠骨原代間充質(zhì)干細(xì)胞(mMSCs)和自發(fā)性老年性骨質(zhì)疏松小鼠的原代骨間充質(zhì)干細(xì)胞(SmMSCs)的增殖能力和分化能力的差異。其次,觀察了羅格列酮(Ppar γ 2激動(dòng)劑)處理的mMSCs和SmMSCs分化能力的變化,并證實(shí)Pparγ 2與OGN互為反向表達(dá)變化。最后,通過慢病毒感染系統(tǒng)(PLJM1-EGFP)持續(xù)高表達(dá)OGN后,分析成脂成骨分化中的特異基因的表達(dá)來探討升高OGN是否可增強(qiáng)SmMSCs的成骨作用,并嘗試探討其機(jī)制。結(jié)果:穩(wěn)定高表達(dá)OGN可增加Wnt5b、Runx2、OCN、ALP、Colla1的表達(dá),促進(jìn)成骨分化和增加骨形成,并可降低Pparγ2的表達(dá),起到抑制骨MSCs成脂分化減少脂肪細(xì)胞形成,起到抵抗老年性骨質(zhì)疏松的作用。結(jié)論:OGN促進(jìn)骨MSCs向成骨分化,抑制成脂分化,在骨髓肥胖中可能起著重要的抑制作用,并可能為老年骨質(zhì)疏松癥和老年肥胖的治療提供新的靶點(diǎn)。
【圖文】：

４．１．邋２羅格列酮抑制ｍＭＳＣｓ成骨分化時(shí)ＯＧＮ的表達(dá)，抑制骨形成逡逑Ｐｐａｒ邋丫邋２配體（受體激動(dòng)劑）－羅格列酮（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）可抑制ｍＭＳＣｓ逡逑向成骨細(xì)胞方向分化，抑制骨基質(zhì)礦化和骨形成。如圖２Ａ所示，在成骨誘導(dǎo)培逡逑養(yǎng)基中加入不同劑量的羅格列酮。與對(duì)照相比，ＡＬＰ染色結(jié)果顯示２０邋ＵＭ羅格逡逑列酮處理的ｍＭＳＣ不能被誘導(dǎo)有效的成骨礦化。逡逑接下來，我們比較了羅格列酮對(duì)ｍＭＳＣｓ中特異性基因的表達(dá)影響。圖２Ｃ逡逑顯示不同濃度（０．５ＵＭ，邋５ｕＭ，邋２０ｕＭ，ＯｕＭ作為對(duì)照）的羅格列酮都可促進(jìn)逡逑Ｐｐａｒ丫２的表達(dá)。與對(duì)照組相比，５邋ＵＭ的羅格列酮僅在成骨誘導(dǎo)第１天時(shí)升高逡逑Ｐｐａｒ邋丫邋２水平，而２０邋ｐ邋Ｍ羅格歹０酮貝ｉｊ可顯著上調(diào)ｍＭＳＣｓ中Ｐｐａｒ邋ｙ邋２邋ｍＲＮＡ水平逡逑８－１０倍，較５邋ｕＭ組升高５？９倍。逡逑羅格列酮還能有效抑制ｍＭＳＣｓ細(xì)胞中ＯＧＮ的ｍＲＮＡ表達(dá)。在成骨誘導(dǎo)逡逑第５天，與對(duì)照組相比，加入羅格列酮的ｍＭＳＣｓ中ＯＧＮ的ｍＲＮＡ降低了邋６４％逡逑（２０邋ＵＭ羅格列酮）和４５．５％邋（５邋ＨＭ羅格列酮）（圖２Ｄ）。這些結(jié)果表明

構(gòu)建過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒（ＰＵＭ１－ＥＧＦＰ－ＯＧＮ），通過病毒包裝感染逡逑ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞，在用收集的病毒上清感染ｍＭＳＣｓ，通過篩選可得到持續(xù)高表達(dá)逡逑ＯＧＮ的ＭＳＣｓ細(xì)胞株。圖３Ａ和３Ｂ，與空載對(duì)照處理的細(xì)胞相比（作為對(duì)照組），逡逑ＡＬＰ染色的結(jié)果表明，高表達(dá)ＯＧＮ可促進(jìn)ｍＭＳＣｓ成骨誘導(dǎo)后第９天和第１４逡逑天的ｍＭＳＣｓ礦化。通過檢測(cè)細(xì)胞ＡＬＰ活性和ＡＬＰ染色定量，，與對(duì)照相比，高逡逑表達(dá)ＯＧＮ的ｍＭＳＣｓ的ＡＬＰ活性平均增加５６％邋（第９天）和７７．８％邋（第１４天）。逡逑基于這些結(jié)果，可以證實(shí)持續(xù)高表達(dá)ＯＧＮ可促進(jìn)ｍＭＳＣ的成骨分化和骨礦化形逡逑成邐。逡逑４２逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R580

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本文編號(hào)：2624289