發(fā)布時(shí)間：2020-04-11 15:32

【摘要】：目的:觀察持續(xù)性高糖及波動(dòng)性高糖對(duì)MC3T3-E1成骨細(xì)胞影響及分子機(jī)制的研究。方法:體外培養(yǎng)MC3T3-E1成骨細(xì)胞,分為正常對(duì)照組、持續(xù)性高糖組、波動(dòng)性高糖組、N-乙酰半胱氨酸(NAC)組及氯喹(CQ)組。NAC組包括NAC組、持續(xù)性高糖+NAC組和波動(dòng)性高糖+NAC組;CQ組包括CQ組、持續(xù)性高糖+CQ組和波動(dòng)性高糖+CQ組。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,DCFH-DA和MitoSOX熒光探針觀察細(xì)胞總體氧化應(yīng)激水平和線粒體氧化應(yīng)激水平,JC-1染料檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位變化,Western blot和細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá),透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬小體形成。結(jié)果:(1)與正常對(duì)照組相比,持續(xù)高糖組和波動(dòng)性高糖組細(xì)胞增殖下降、凋亡增加,波動(dòng)性高糖組變化更顯著。與正常對(duì)照組相比,持續(xù)高糖組和波動(dòng)高糖組Bcl-2蛋白表達(dá)減少,Bax、Caspase3、Cleaved caspase3及Cytochrome c蛋白表達(dá)增加,且波動(dòng)性高糖組較持續(xù)高糖組改變更顯著。熒光結(jié)果顯示持續(xù)性高糖及波動(dòng)性高糖組較正常對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)ROS、線粒體內(nèi)ROS生成增多,線粒體膜電位(△Ψm)下降,波動(dòng)性高糖組變化更加明顯。(2)高糖狀態(tài)下,MC3T3-E1成骨細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1及線粒體自噬相關(guān)蛋白BNIP3表達(dá)增多,P62蛋白表達(dá)減少,自噬小體生成增多,波動(dòng)性高糖組變化更明顯。(3)在MC3T3-E1成骨細(xì)胞中加入NAC后,細(xì)胞內(nèi)ROS生成減少,Bcl-2表達(dá)增加,Bax、Caspase3、Cleaved caspase3 及 Cytochrome c 表達(dá)減少,LC3-Ⅱ、Beclin1及Bnip3蛋白減少,細(xì)胞凋亡率降低。(4)與正常對(duì)照組比較,持續(xù)性高糖組、波動(dòng)性高糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞內(nèi)p-Akt、p-mTOR減少,且波動(dòng)性高糖組下降更明顯;加入NAC后,MC3T3-E1成骨細(xì)胞p-Akt及p-mTOR表達(dá)增加。(5)與正常對(duì)照組相比,高糖狀態(tài)導(dǎo)致MC3T3-E1成骨細(xì)胞凋亡增加,加入CQ后,細(xì)胞凋亡進(jìn)一步顯著增加,同時(shí)LC3-Ⅱ蛋白增多,Bnip3蛋白表達(dá)減少。結(jié)論:(1)高糖誘導(dǎo)MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖降低、凋亡增加,且波動(dòng)性高糖的影響較持續(xù)性高糖更明顯。(2)高糖影響MC3T3-E1成骨細(xì)胞的機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高、線粒體損傷及自噬相關(guān)。
【圖文】：

與正常對(duì)照組相比，持續(xù)性高糖組和波動(dòng)性高糖組ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１成骨細(xì)胞增殖均逡逑顯著下降（Ｐ＜0．0ｌ）；與持續(xù)性高糖組相比，波動(dòng)性高糖組細(xì)胞增殖下降更明顯，差異逡逑有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＜0．0５）（圖１）。逡逑１．５－１逡逑Ｉ１＂邋■邋＊邋－逡逑|>通置１逡逑圖１持續(xù)性高糖及波動(dòng)性高糖對(duì)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞增殖的影響逡逑Ｆｉｇ邋１邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ＨＧ邋ａｎｄ邋ＧＦ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１邋ｃｅｌｌｓ逡逑注：與正常對(duì)照組相比，＊Ｐ＜邋０．０１；與持續(xù)性高糖組相比，，＃＿Ｐ＜０．０５。逡逑＊Ｐ＜邋０．０１，邋ｖｓ邋Ｃｔｒ邋ｇｒｏｕｐ；邋＃Ｐ＜０．０５，邋ｖｓ邋ＨＧ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑２．１．２持續(xù)性高糠及波動(dòng)性高糖對(duì)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞凋亡的影響逡逑與正常對(duì)照組相比，持續(xù)性高糖組和波動(dòng)性高糖組細(xì)胞凋亡率均升高（尸＜０．邋０５；逡逑Ｐ＜０．邋０１）。與持續(xù)性高糖組相比，波動(dòng)性高糖組細(xì)胞凋亡顯著增多0Ｐ＜０．邋０１）（圖２）。逡逑１６逡逑

熒光顯微鏡下觀察可見持續(xù)性氋糖組和波動(dòng)性氋糖組ＤＣＦＨ－ＤＡ探針熒光強(qiáng)逡逑度較正常對(duì)照組均增強(qiáng)；與持續(xù)性高糖組相比，波動(dòng)性高糖組熒光強(qiáng)度增強(qiáng)更為逡逑明顯（圖３）。逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.1;R580

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 郭寶磊;楊茂偉;梁?jiǎn)?曹軍軍;楊蕾;郭曉東;;高糖通過(guò)提高ROS水平和鈣超載誘導(dǎo)小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)病理生理雜志;2012年02期

2 周瑋;萬(wàn)利;張勇;朱娟;荀明生;王加林;;高糖及高糖波動(dòng)對(duì)MG63細(xì)胞株氧化應(yīng)激的影響[J];中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志;2011年12期

本文編號(hào)：2623749