發(fā)布時間：2020-03-31 00:11

【摘要】：目的:探討古漢養(yǎng)生精對腎陽虛哮喘大鼠P62、TGF-β1表達(dá)的影響。方法:選取30只4周齡體質(zhì)量為120±10g清潔級健康的雄性wistar大鼠,按隨機(jī)數(shù)字表分成6組,每組5只:正常組(A組)、哮喘組(B組)、腎陽虛哮喘組(C組)、古漢養(yǎng)生精低、中、高劑量(分別為4ml/kg;8ml/kg;16ml/kg)+腎陽虛哮喘組(D、E、F組),以氫化可的松25 mg.kg~(-1).d~(-1)肌注制備腎陽虛模型,在該模型的基礎(chǔ)上以卵蛋白(OVA)與氫氧化鋁致敏、激發(fā)制備腎陽虛哮喘模型,治療組于激發(fā)開始每天給予相應(yīng)劑量古漢養(yǎng)生精灌胃。在末次激發(fā)24 h后取大鼠左肺組織行蘇木精-伊紅(HE)染色,應(yīng)用圖像分析技術(shù)測定Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm等重塑指標(biāo);取右肺組織使用QPCR檢測TGF-β1 mRNA的表達(dá),Western blotting檢測P62蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.HE染色:A組大鼠支氣管結(jié)構(gòu)完整,未見明顯炎性細(xì)胞浸潤,B、C組可見支氣管粘膜和支氣管壁周圍炎癥細(xì)胞的浸潤,支氣管管壁增粗,粘膜充血腫脹,平滑肌、基底膜增厚,而C組炎癥細(xì)胞浸潤及氣道結(jié)構(gòu)改變程度較B組明顯,且可見管腔明顯狹窄、塌陷,D、E、F組較C組上述改變明顯減輕(P0.05),D、E、F組之間差異無顯著性。2.QPCR測定:哮喘組較正常組大鼠肺組織中TGF-β1 mRNA表達(dá)量明顯上升(P0.05),C組TGF-β1 mRNA表達(dá)量較B組上調(diào)(P0.05),D、E、F組TGF-β1 mRNA表達(dá)量較C組明顯下降(P0.05),D、E、F組之間TGF-β1 mRNA表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3.Western blotting檢測:B、C組較A組大鼠肺組織P62蛋白表達(dá)降低;C組較B組大鼠肺組織P62蛋白表達(dá)下降,治療組與腎陽虛哮喘組比較P62蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);不同劑量古漢養(yǎng)生精組P62蛋白表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4.Image-proplus圖像分析軟件分析:B組與正常組比較Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm值明顯上升(P0.05),C組Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm高于B組(P0.05),D、E、F組Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm低于C組(P0.05),D、E、F組之間Wat/Pbm、Wai/Pbm、Wam/Pbm比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1.腎陽虛哮喘大鼠P62蛋白的表達(dá)下調(diào),TGF-β1表達(dá)明顯上調(diào)。2.古漢養(yǎng)生精對腎陽虛哮喘大鼠的氣道重塑有抑制作用,可能機(jī)制與調(diào)控P62、TGF-β1的表達(dá)相關(guān)。
【圖文】：

也是計算不出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在第二個階段階段，PCR 產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間才存在線性關(guān)系�；霎a(chǎn)物不斷累積，相應(yīng)的熒光信分也不斷的在增加，每進(jìn)行一個循環(huán)就采集一次熒光信分5.8 熔解曲線不同的反應(yīng)產(chǎn)物可以通過溶解曲線來反應(yīng)，包括非特異性產(chǎn)物�；龇磻�(yīng)完成后，通過調(diào)節(jié)溫度同時監(jiān)測每一步的熒光信分，來繪制溶解曲線，待雙鏈DNA 發(fā)生變性后，熒光信分降低與熒光染料轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x狀態(tài)相關(guān)，根據(jù)熒光信分改變的負(fù)的一次導(dǎo)數(shù)與溫度作圖，在基增產(chǎn)物的溶解溫度上有一特征峰（Tm，DNA 雙鏈解鏈 50％的溫度），用這個特征峰就可以將特異產(chǎn)物與其它產(chǎn)物如引物二聚體區(qū)分開，因為它們在不同的溫度溶解。單一峰，無非特異性產(chǎn)物，定量準(zhǔn)確；出現(xiàn)雜峰，存在非特異性產(chǎn)物，定量不準(zhǔn)確。實驗結(jié)果為單一峰，說明無非特異性產(chǎn)物，，定量準(zhǔn)確。

也是計算不出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在第二個階段階段，PCR 產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間才存在線性關(guān)系�；霎a(chǎn)物不斷累積，相應(yīng)的熒光信分也不斷的在增加，每進(jìn)行一個循環(huán)就采集一次熒光信分5.8 熔解曲線不同的反應(yīng)產(chǎn)物可以通過溶解曲線來反應(yīng)，包括非特異性產(chǎn)物�；龇磻�(yīng)完成后，通過調(diào)節(jié)溫度同時監(jiān)測每一步的熒光信分，來繪制溶解曲線，待雙鏈DNA 發(fā)生變性后，熒光信分降低與熒光染料轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x狀態(tài)相關(guān)，根據(jù)熒光信分改變的負(fù)的一次導(dǎo)數(shù)與溫度作圖，在基增產(chǎn)物的溶解溫度上有一特征峰（Tm，DNA 雙鏈解鏈 50％的溫度），用這個特征峰就可以將特異產(chǎn)物與其它產(chǎn)物如引物二聚體區(qū)分開，因為它們在不同的溫度溶解。單一峰，無非特異性產(chǎn)物，定量準(zhǔn)確；出現(xiàn)雜峰，存在非特異性產(chǎn)物，定量不準(zhǔn)確。實驗結(jié)果為單一峰，說明無非特異性產(chǎn)物，定量準(zhǔn)確。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R562.25

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本文編號：2608261