【摘要】：目的:分析鑒定原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(primary gouty arthritis,GA)患者PBMCs中長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoing RNA,lncRNA)的表達(dá),篩選與痛風(fēng)相關(guān)的差異表達(dá)lncRNAs,重點(diǎn)研究AJ227913在GA發(fā)病機(jī)制中可能的作用,并結(jié)合臨床數(shù)據(jù)探討其潛在的臨床意義。方法:1).采集健康體檢者和原發(fā)性痛風(fēng)患者外周血標(biāo)本各3例,分離提取總RNA,并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。利用lncRNA表達(dá)譜芯片技術(shù),檢測(cè)兩組間差異表達(dá)lncRNAs。差異表達(dá)的基因進(jìn)行GO及Pathway分析;2).選取痛風(fēng)患者急性期(AGA)30例,非急性期(NAGA)24例及健康對(duì)照(HC)24例,懫用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)擴(kuò)大樣本量對(duì)篩選出的感興趣的lncRNA進(jìn)行驗(yàn)證,同時(shí)進(jìn)一步行生物信息學(xué)分析。3).選擇關(guān)鍵信號(hào)節(jié)點(diǎn)分子,利用RT-qPCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平及臨床相關(guān)性進(jìn)行驗(yàn)證;4).選取NAGA組和HC組各5例,100ug/ml尿酸鹽刺激全血后提取PBMCs,分別用RT-qPCR和ELISA檢測(cè)感興趣的lncRNA及關(guān)鍵信號(hào)節(jié)點(diǎn)分子轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,和血漿中蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1).lncRNA表達(dá)譜芯片比較發(fā)現(xiàn),2倍以上差異表達(dá)的lncRNA共1815個(gè)(P0.005),上調(diào)表達(dá)875個(gè),下調(diào)表達(dá)有940個(gè);GO分析發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的基因主要參與蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等;Pathway分析顯示它們主要參與細(xì)胞因子和炎癥反應(yīng)途徑,糖皮質(zhì)激素受體調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)等。擴(kuò)大樣本驗(yàn)證感興趣的lnc RNA與芯片結(jié)果基本吻合;AJ227913、AK001903、ENSG00000239182在AGA、NAGA患者均顯著高于HC組(P均0.05),AGA、NAGA組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;lnc-CCDC64B-1:8在AGA、NAGA患者均顯著低于HC組;2).IL-8在轉(zhuǎn)錄水平和血漿中蛋白濃度AGA組顯著高于NAGA組,NAGA組顯著高于HC組(P均0.05);AJ227913與IL-8轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)在AGA和NAGA呈正相關(guān)(r=0.475,r=0.910,P均0.05);AJ227913轉(zhuǎn)錄水平與血漿中IL-8蛋白濃度在AGA和NAGA呈正相關(guān)(r=0.971,r=0.814,P均0.05);轉(zhuǎn)錄水平和血漿中IL-8在AGA和NAGA呈正相關(guān)(r=0.453,r=0.933,P均0.05);3).HC組外周血經(jīng)100μg/ml的MSU刺激6h后AJ227913表達(dá)與刺激對(duì)照組無(wú)明顯差異。NAGA組患者外周血經(jīng)100μg/ml的MSU刺激6h后AJ227913的表達(dá)較刺激對(duì)照組顯著升高(P0.05);HC和NAGA組外周血經(jīng)100μg/ml MSU刺激6h后血漿中IL-8蛋白濃度較前明顯升高,NAGA組外周血經(jīng)MSU刺激后IL-8基因表達(dá)量較前顯著升高(P0.05),HC組外周血經(jīng)MSU刺激后IL-8的基因表達(dá)量較前無(wú)明顯差異;4).AJ227913轉(zhuǎn)錄水平與尿素(UREA)(r=0.608,P0.05)、肌酐(CREA)(r=0.337,P0.05)、胱抑素(CYSC)(r=0.422,P0.01)呈正相關(guān)。結(jié)論:1).與健康體檢者相比,痛風(fēng)患者lncRNAs表達(dá)譜發(fā)生了顯著變化。其中AJ227913、AK001903、ENSG00000239182在痛風(fēng)患者中表達(dá)上調(diào),lnc-CCDC64B-1:8在痛風(fēng)患者中表達(dá)下降。2).AJ227913在痛風(fēng)患者中的異常表達(dá)提示其可能參與了痛風(fēng)的炎癥反應(yīng)過(guò)程,因此,可能從新的角度闡釋原發(fā)性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制。
【圖文】：

GA組和HC組的lncRNAs表達(dá)譜芯片掃描結(jié)果

差異表達(dá)lncRNAs(A)和mRNAs(B)的聚類分析
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R589.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2535919