【摘要】：PMOP在中、老年女性中常表現(xiàn)為無癥狀的骨密度降低,故容易被忽略而引發(fā)嚴重后果,目前關注度逐年漸增,且亟待更加有效的治療方案。擁有良好成骨效應的MSCs常用于各種骨相關疾病的研究和治療。FSH是與女性絕經(jīng)期骨重塑非常相關的一種垂體糖蛋白激素,其常通過特異性β亞基(FSHβ)與FSHR受體結(jié)合而發(fā)揮直接的生理效應。BMP9是一種潛在高效的促成骨因子,且在MEFs中能上調(diào)FSHβ的表達。然而,過表達FSHβ能否影響B(tài)MP9對MEFs的骨向分化,目前還不清楚。在本實驗中,我們探究了FSHβ在BMP9誘導MEFs成骨分化過程中的作用及其可能的機制。我們發(fā)現(xiàn)過表達FSHβ能顯著增加BMP9誘導MEFs骨化過程中的ALP活性、早期成骨因子(如:Runx2和Osx)和晚期成骨指標(如:OCN和OPN)的表達,以及鈣鹽沉積。在機制方面,過表達FSHβ能明顯增強BMP9誘導MEFs骨化過程中BMP/Smad信號轉(zhuǎn)導,表現(xiàn)為在磷酸化Smad1/5/8、Smad6,以及Smad7的增加;而運用FSHβ的抗體耗竭并阻礙其作用的時,卻表現(xiàn)為相反的作用。此外,運用腺苷酸環(huán)化酶抑制劑,能明顯減弱FSHβ對BMP9誘導MEFs過程中的ALP活性和BMP/Smad信號轉(zhuǎn)導。綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)FSHβ可能部分通過增強FSH/FSHR/c AMP依賴的BMP/Smad信號轉(zhuǎn)導途徑,從而協(xié)同BMP9誘導MEFs成骨分化。
【圖文】：

圖 1.1 FSHβ、BMP9 和 FSHR 在 MSCs 中有內(nèi)源性表達Fig1.1 The endogenous expression of FSHβ,BMP9,and FSHR in MSCs2.2 在 MEFs 中，F(xiàn)SHβ 能上調(diào) BMP9 的表達，而 BMP9 也能部分上調(diào) FSHβ由于在四種 MSCs 中，F(xiàn)SHβ 對 BMP9 誘導 MEFs 的 ALP 活性的協(xié)同作用最顯著和穩(wěn)定（圖 S1,S2），故后續(xù)實驗選擇 MEFs 細胞。那么隨后我們檢測了在MEFs 中，BMP9 與 FSHβ 對相互表達的影響。采用隨病毒滴度依次增加的 Ad-BMP9或 Ad-FSHβ 轉(zhuǎn)染 MEFs，并在 24h 觀察的熒光感染率（圖 1.2A，1.3A），以及 Westernblot 結(jié)果顯示在 MEFs 中，BMP9 部分上調(diào) FSHβ 的表達（圖 1.2B），以及 FSHβ也能上調(diào) BMP9 的表達（圖 1.3B）。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文2 結(jié)果2.1 FSHβ、BMP9 和 FSHR 在 MSCs 中有內(nèi)源性表達本實驗中，我們首先檢測了幾種 MSCs 中 FSHβ、BMP9 和 FSHR 的內(nèi)源性表達，即：C3H10T1/2、MEFs、C2C12 和 MC3T3-E1。運用 RT-PCR 檢測到在該幾種 MSCs 中有 FSHβ、BMP9 和 FSHR 的表達（圖 1.1A）,運用 Western blot 檢測到在該幾種 MSCs 中有 FSHβ 和 BMP9 的表達（圖 1.1B）。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R580

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本文編號：2531995