【摘要】：目的了解新診斷T2DM患者中鐵過載發(fā)病狀況,對(duì)12例新診斷T2DM合并鐵過載患者(肝臟穿刺組織普魯士藍(lán)染色陽性)進(jìn)行SLC40A1(NG_009027.1)基因測(cè)序并分析。方法收集2014年12月至2015年12月我院內(nèi)分泌科新診斷T2DM患者共198例的病歷資料,其中鐵蛋白升高且行肝臟穿刺組織普魯士藍(lán)染色陽性患者12例,通過肝臟穿刺組織石蠟切片提取基因組DNA,采用PCR擴(kuò)增SLC40A1基因各外顯子片段,瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)、純化后,雙向直接測(cè)序。結(jié)果198例新診斷T2DM患者中鐵過載發(fā)病率為6%;測(cè)序結(jié)果同GenBank中對(duì)應(yīng)序列進(jìn)行對(duì)比,12例新診斷T2DM合并鐵過載患者SLC40A1基因第6個(gè)外顯子區(qū)域均有1處堿基改變:c.663TC,但其編碼的氨基酸未發(fā)生改變221VV,為同義突變。結(jié)論鐵過載在新診斷T2DM患者中有一定發(fā)病率,原因可能并非SLC40A1基因突變所致,有待進(jìn)一步研究。
【圖文】：

圖１１２例患者肝臟穿刺組織病理圖普魯士藍(lán)染色結(jié)果（４００×）Ｆｉｇ１Ｌｉｖｅｒｂｉｏｐｓｙｔｉｓｓｕｅｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆ１２ｃａｓｅｓＰｒｕｓｓｉａｎｂｌｕｅｓｔａｉｎｉｎｇ（４００×）表２ＳＬＣ４０Ａ１各引物序列及ＰＣＲ退火溫度Ｔａｂ２ＰｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｄＰＣＲａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆＳＬＣ４０Ａ１外顯子ＥｘｏｎＰＣＲ引物序列ＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ目的片段長度Ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈ（ｂｐ）退火溫度Ａｎｎｅａｌｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（℃）１Ｆ５’－ＡＴＡＧＣＡＧＣＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧ－３’Ｒ５’－ＧＴＡＧＡＧＴＴＧＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣ－３’１４９６２２Ｆ５’－ＡＴＧＴＡＣＧＴＧＧＴＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧ－３’Ｒ５’－ＧＧＣＴＴＡＡＴＡＣＡＡＣＴＧＧＣＴＡＧＡＡＣＧ－３’２７７６０３Ｆ５’－ＡＡＴＧＴＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＴＧＣＣ－３’Ｒ５’－ＡＧＡＧＧＴＧＧＴＧＣＣＡＴＣＴＡＡＧ－３’４１５６４４Ｆ５’－ＧＡＧＡＣＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＡＴＧＴＡＣＡＣ－３’Ｒ５’－ＣＴＡＣＣＡＧＡＴＡＴＴＣＡＡＴＴＴＴＣＴＧＣＣ－３’２１０５８５Ｆ５’－ＴＴＡＡＡＣＴＧＣＣＴＴＧＴＴＴＡＧＴＧ－３’Ｒ５’－ＧＣＣＴＣＡＴＴＴＡＴＣＡＣＣＡＣＣＧ－３’２７８５６６Ｆ５’－ＴＴＧＴＧＴＡＡＡＴＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣ－３’Ｒ５’－ＣＣＴＣＧＴＣＴＡＣＣＡＡＡＧＣＧＡＴＡ－３’４６０５６７－１Ｆ５’－ＧＣＴＴＴＴＡＴＴＴＣＴＡＣＡＴ

“變性、退火、延伸”循環(huán)３５次，７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ產(chǎn)物編號(hào)后放置于－２０℃保存。４．ＰＣＲ產(chǎn)物測(cè)序：ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)為所需目的片段，經(jīng)純化回收交由Ｔｈｅｒ－ｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司進(jìn)行雙向直接測(cè)序（美國ＡＢＩ３７３０基因測(cè)序儀），結(jié)果以Ｃｈｒｏ－ｍａｔｏｇｒａｍ文件報(bào)回，通過Ｍｕｔａｔｉｏｎｓｕｒｖｅｙｏｒ軟件與ＧｅｎＢａｎｋ中ＳＬＣ４０Ａ１基因序列進(jìn)行對(duì)比分析。（圖２）圖２各外顯子片段ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖Ｆｉｇ２ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍｏｆＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｅａｃｈｅｘｏｎｆｒａｇｍｅｎｔ結(jié)果１９８例Ｔ２ＤＭ患者中，鐵蛋白升高且經(jīng)肝穿刺活組織檢查鐵染色陽性患者１２例，鐵過載發(fā)生率約為６％。經(jīng)雙向直接測(cè)序檢測(cè)，與Ｇｅｎｂａｎｋ中ＳＬＣ４０Ａ１基因序列進(jìn)行進(jìn)行對(duì)比分析，１２例新診斷Ｔ２ＤＭ合并鐵過載患者ＳＬＣ４０Ａ１基因第６個(gè)外顯子區(qū)域均有一處堿基改變：ｃ．６６３Ｔ＞Ｃ，但其編碼的氨基酸未發(fā)生改變２２１Ｖ＞Ｖ，，為同義突變（圖３）。由于鐵代謝復(fù)雜，鐵代謝相關(guān)基因有一定地理差異，本研究所檢測(cè)Ｔ２ＤＭ合并鐵過載患者鐵過載發(fā)生的原因還需要進(jìn)一步探索。討論本研究發(fā)現(xiàn)，新診斷Ｔ２ＤＭ患者中鐵過載發(fā)病率約為６％。排除常見鐵過載原因后，選擇鐵蛋白升高且肝臟穿刺組織普魯士藍(lán)染色陽性患者１２例，進(jìn)行ＳＬＣ４０Ａ１基因直接測(cè)序，該１２例患者第６個(gè)外顯子區(qū)域均有一處堿基改變：ｃ．６６３Ｔ＞Ｃ，但其編碼的氨基酸未發(fā)生改
【作者單位】： 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【分類號(hào)】：R587.1


本文編號(hào)：2531514