【摘要】：目的:糖尿病是慢性、代謝性內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病,可引起一系列眼表疾病。干眼是常見的糖尿病眼表疾病,其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。過(guò)氧化物酶體增生物激活受體γ屬于核受體超家族,通過(guò)與不同功能的配體結(jié)合發(fā)揮作用,其激動(dòng)劑已廣泛應(yīng)用于糖尿病降血糖及其并發(fā)癥的治療。本研究通過(guò)在糖尿病大鼠模型上誘導(dǎo)干眼探討糖尿病合并干眼大鼠模型的建立方法和眼表改變以及PPARγ在糖尿病合并干眼大鼠模型中角膜,結(jié)膜的表達(dá)。方法:40只健康雄性Vistar大鼠,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:A.正常對(duì)照組(Normal組)10只;B.干眼組(DE組)10只;C.糖尿病組(DM組)10只;D糖尿病干眼組(DE+DM組)10只。采用單次鼠尾靜脈注射1mg/50μL鏈脲佐菌素(STZ)45mg/kg體重(稀釋于0.2%檸檬酸鈉緩沖液,PH4.5)誘導(dǎo)糖尿病模型,大鼠自由飲水進(jìn)食72h后,尾靜脈取血測(cè)血糖,以血糖≥30mmol/L作為糖尿病大鼠模型造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。Wistar大鼠干眼模型誘導(dǎo)方法是右眼應(yīng)用0.1%苯扎氯銨(溶于0.9%Nacl)20μL點(diǎn)眼,一天兩次(8:00;17:00)。分別于造模前及造模后每周測(cè)大鼠體重及鼠尾靜脈取血測(cè)血糖水平,觀察大鼠糖尿病模型穩(wěn)定性。四組大鼠分別于用藥后7、14、21、28天檢測(cè)淚液分泌試驗(yàn)(ShirmerⅠtest,SIt)、淚膜破裂時(shí)間(Break-up time,BUT)、角膜上皮熒光素鈉染色評(píng)分,并于用藥后28天給藥及檢查結(jié)束后,取大鼠右眼眼球及角膜,結(jié)膜組織,進(jìn)行角膜HE染色觀察角膜水腫,各層細(xì)胞排列紊亂,異常增生等形態(tài)變化;結(jié)膜PAS染色觀察結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)異常和數(shù)量變化情況;大鼠角膜,結(jié)膜組織應(yīng)用Real-time PCR法檢測(cè)PPARγmRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:Wistar大鼠糖尿病模型誘導(dǎo)后,血糖持續(xù)≥30mmol/L,糖尿病,糖尿病干眼組大鼠與正常對(duì)照組大鼠相比,體重增長(zhǎng)不佳,結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.001),說(shuō)明糖尿病模型誘導(dǎo)成功且穩(wěn)定。干眼臨床指標(biāo)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,干眼,糖尿病,糖尿病干眼組大鼠晚期淚液分泌量下降(21天:Normal組vs DE組,P0.05;Normal組vs DM組,P0.001。28天:Normal組vs DM組,P0.05;Normal組vs DE+DM組,P0.01),然而三個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠之間淚液分泌量減少無(wú)明顯差異(均P0.05);干眼和糖尿病組大鼠淚膜破裂時(shí)間均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Normal組vs DE組:7天,P0.05;21天,28天,均P0.001;Normal組vs DM組:21,28天,均P0.01;Normal組vs DE+DM組:7,14,21,28天,均P0.01),糖尿病干眼組大鼠與糖尿病組大鼠相比,造模后14,21,28天時(shí)淚膜不穩(wěn),淚膜破裂時(shí)間降低,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.001),干眼組大鼠與糖尿病干眼組大鼠相比,淚膜破裂時(shí)間結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);角膜熒光素鈉染色結(jié)果顯示與正常對(duì)照組相比,干眼,糖尿病,糖尿病干眼組大鼠角膜表面熒光素鈉明顯著染,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Normal組vs DM組:7天,P0.001;Normal組vs DE組:14,21,28天,均P0.001;Normal組vs DE+DM組,7,14,21,28天,均P0.001),糖尿病組與糖尿病干眼組大鼠相比,造模后21,28天結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.001)。角膜HE染色結(jié)果顯示,糖尿病干眼組大鼠比糖尿病組,干眼組大鼠角膜更加水腫增厚,上皮細(xì)胞異常增生,排列紊亂,干眼組和糖尿病組大鼠角膜異常程度接近。結(jié)膜PAS染色結(jié)果顯示,干眼,糖尿病,糖尿病干眼組大鼠結(jié)膜杯狀細(xì)胞萎縮,形態(tài)異常,數(shù)量明顯減少,糖尿病干眼組與干眼,糖尿病組大鼠相比,結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)目更加減少,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(DM組vs DE+DM組,P0.05;DE組vs DE+DM組,P0.01)。與正常對(duì)照組相比,糖尿病,糖尿病干眼組大鼠角膜,結(jié)膜PPARγmRNA表達(dá)上調(diào),結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Normal vs DM,Normal vs DE+DM,均P0.01),DE組和DE+DM組結(jié)果相比,PPARγmRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01)。結(jié)論:糖尿病和干眼Wistar大鼠淚膜穩(wěn)定性降低,角膜和結(jié)膜杯狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)異常,糖尿病與干眼因素相結(jié)合加重大鼠干眼程度,角膜損傷,結(jié)膜杯狀細(xì)胞萎縮,數(shù)目降低。大鼠角膜,結(jié)膜PPARγmRNA表達(dá)與糖尿病和干眼因素相關(guān)。
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圖片說(shuō)明： 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果2.1 大鼠體重和血糖糖尿病大鼠模型誘導(dǎo)成功后自由飲水與進(jìn)食，正常飼檢測(cè)體重，發(fā)現(xiàn)大鼠體重增長(zhǎng)不佳，與正常對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P <0.001）（圖 1）。 本實(shí)驗(yàn)以鼠尾靜脈取作為大鼠糖尿病模型誘導(dǎo)成功的標(biāo)準(zhǔn)，正常 Wistar 大鼠隨觀察大鼠血糖檢測(cè)結(jié)果，糖尿病造模后正常飼養(yǎng) 7，14，2脈鼠尾靜脈隨機(jī)血糖均大于 30mmol/L（表 6），大鼠體重和糖尿病模型誘導(dǎo)成功且穩(wěn)定，有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步研究。
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圖片說(shuō)明： 素對(duì)于早期淚液分泌無(wú)明顯影響，，晚期可影響淚液分泌，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組相比，淚液分泌量減少無(wú)明顯差異，干眼和糖尿病兩個(gè)因素疊加并不能明顯加重淚液分泌量降低（圖2）。圖2 各組大鼠淚液分泌試驗(yàn)2.2.2 BUT與正常對(duì)照組相比，干眼組大鼠在用藥后7天，21天，28天，淚膜破裂時(shí)間明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（7天，P<0.05；21天，28天
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R-332;R587.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 金姬,陳麗紅,劉秀倫,金崗生,樓善賢,方逢年;糖尿病患者淚膜功能的研究[J];中華眼科雜志;2003年01期

本文編號(hào)：2515309