【摘要】：目的:1.通過(guò)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的分離培養(yǎng)與鑒定,為實(shí)驗(yàn)提供了合格的細(xì)胞來(lái)源。2.探討不同濃度甲狀旁腺激素1-34(PTH1-34)對(duì)大鼠BMSCs成骨分化的影響及其可能的作用機(jī)制,進(jìn)而為甲狀旁腺激素治療骨質(zhì)疏松癥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與依據(jù)。方法:1.通過(guò)貼壁培養(yǎng)的方法分離培養(yǎng)骨髓間充干細(xì)胞并且對(duì)其進(jìn)行鑒定。2.不同濃度PTH1-34(0、10-10、10-9、10-8mol/L)間斷作用于BMSCs,以48個(gè)小時(shí)作為一個(gè)周期,前6個(gè)小時(shí)加藥,后42個(gè)小時(shí)不加藥,采用MTT法對(duì)BMSCs的增殖情況進(jìn)行檢測(cè)。3.不同濃度PTH1-34(0、10-10、10-9、10-8mol/L)間斷作用于BMSCs,以48個(gè)小時(shí)作為一個(gè)周期,前6個(gè)小時(shí)加藥,后42個(gè)小時(shí)不加藥,采用PNPP法檢測(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性、放射免疫法檢測(cè)骨鈣素(BGP)含量和實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)Runx2 m RNA的表達(dá)量。4.采用數(shù)據(jù)軟件包SPSS22.0對(duì)所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)方式表示,組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn),P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.在顯微鏡下觀察,原代BMSCs培養(yǎng)3天后貼壁并呈現(xiàn)梭形,5天后排列呈集落狀,10-14天左右鋪滿瓶壁;第三代BMSCs的生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示,前1-2天為潛伏期,3-5天為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,之后為平臺(tái)期;細(xì)胞周期測(cè)定大部分處在G1/G0期;流式細(xì)胞分析儀測(cè)定BMSCs表面抗原標(biāo)志物CD29、CD44陽(yáng)性表達(dá),CD45陰性表達(dá);將BMSCs誘導(dǎo)分化成為成骨細(xì)胞后進(jìn)行茜素紅染色,可以觀察到鈣結(jié)節(jié),將BMSCs誘導(dǎo)分化成為脂肪細(xì)胞后進(jìn)行油紅O染色,可以觀察到脂滴。2.將不同濃度PTH1-34(0、10-10、10-9、10-8mol/L)間斷作用于BMSCs,其增殖水平無(wú)明顯變化,各組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.將不同濃度PTH1-34(10-10、10-9、10-8mol/L)間斷作用于BMSCs,其ALP活性、BGP含量及Runx2 m RNA表達(dá)量較對(duì)照組均增加,其中以10-8mol/L PTH1-34組最高,且呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組組間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.BMSCs在體外能被成功分離、純化,并且具有高度的自我更新及多向分化潛能。2.PTH1-34可以促進(jìn)大鼠BMSCs成骨分化。3.PTH1-34可能是通過(guò)上調(diào)Runx2 m RNA表達(dá)來(lái)促進(jìn)大鼠BMSCs成骨分化。
[Abstract]:Objective: 1. Through the isolation, culture and identification of rat bone marrow mesenchymal stem cells (Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs), a qualified cell source was provided for the experiment. 2. To investigate the effect of different concentrations of parathyroid hormone 1 鈮，

本文編號(hào)：2495262