【摘要】：目的探討脂滴包被蛋白5(Plin5)對(duì)高糖高脂誘導(dǎo)的小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。方法將高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞(MCMECs)分別給予0、100、300、500μmol/L棕櫚酸干預(yù)24h。為探索Plin5對(duì)高糖高脂誘導(dǎo)MCMECs損傷的影響及機(jī)制,在300μmol/L棕櫚酸干預(yù)24h基礎(chǔ)上利用siRNA轉(zhuǎn)染敲低細(xì)胞的Plin5表達(dá),將細(xì)胞分為對(duì)照組(僅給予轉(zhuǎn)染試劑處理)、Scra siRNA組(給予轉(zhuǎn)染試劑+非特異陰性siRNA處理)、Plin5siRNA組(給予轉(zhuǎn)染試劑+Plin5特異性siRNA處理)。為進(jìn)一步驗(yàn)證Plin5在高糖高脂導(dǎo)致MCMECs損傷的具體機(jī)制,利用siRNA敲低Plin5表達(dá),再將細(xì)胞分為Vehicle組、N-乙酰半胱氨酸(NAC)組,并給予相同條件的高脂干預(yù)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率,qRT-PCR及Western blotting分別檢測(cè)細(xì)胞Plin5 mRNA及蛋白表達(dá),DHE染色及ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量。結(jié)果 MCMECs凋亡率隨著棕櫚酸濃度的升高而增加(P0.05)。與0μmol/L棕櫚酸相比,300μmol/L棕櫚酸干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯增加,Plin5表達(dá)也明顯升高(P0.05)。在300μmol/L棕櫚酸作用下,與對(duì)照組及Scra siRNA組相比,Plin5 siRNA組細(xì)胞內(nèi)ROS含量及凋亡率明顯增加(P0.05)。與Vehicle組比較,NAC組細(xì)胞ROS水平及細(xì)胞凋亡率均明顯降低(P0.05)。結(jié)論 Plin5可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)減少高糖高脂誘導(dǎo)的小鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lipid drop coated protein 5 (Plin5) on apoptosis of cardiac microvascular endothelial cells induced by high glucose and high fat in mice and its mechanism. Methods (MCMECs) of mouse cardiac microvascular endothelial cells cultured in high glucose medium were treated with 0 100300500 渭 mol / L palmitic acid for 24 h. In order to explore the effect and mechanism of Plin5 on MCMECs damage induced by high glucose and high fat, the cells were treated with 300 渭 mol / L palmitic acid for 24 h, and the cells were divided into control group (treated with transfection reagent only). Scra siRNA group (treated with non-specific negative siRNA) and Plin5siRNA group (treated with Plin5 specific siRNA). In order to further verify the specific mechanism of Plin5 damage induced by high glucose and high fat, siRNA was used to knock down the expression of Plin5, and then the cells were divided into Vehicle group and N-acetylcystine (NAC) group, and the cells were given high fat intervention under the same conditions. The apoptosis rate was detected by flow cytometry, the expression of Plin5 mRNA and protein was detected by qRT-PCR and Western blotting, and the content of reactive oxygen species (ROS) in cells was detected by DHE staining and ELISA kit. Results the apoptosis rate of MCMECs increased with the increase of palmitic acid concentration (P 0.05). Compared with 0 渭 mol / L palmitic acid, the content of ROS and the expression of Plin5 increased significantly after 300 渭 mol / L palmitic acid intervention (P 0.05). Under the action of 300 渭 mol / L palmitic acid, the intracellular ROS content and apoptosis rate in Plin5 siRNA group were significantly higher than those in control group and Scra siRNA group (P 0.05). Compared with Vehicle group, the level of ROS and apoptosis rate in NAC group were significantly decreased (P 0.05). Conclusion Plin5 can reduce the apoptosis of cardiac microvascular endothelial cells induced by high glucose and high fat by inhibiting oxidative stress.
【作者單位】： 陸軍軍醫(yī)大學(xué)(第三軍醫(yī)大學(xué))研究生管理大隊(duì);成都軍區(qū)總醫(yī)院心血管內(nèi)科;西南醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81500208) 四川省杰出青年基金(2017JQ0012) 中國(guó)博士后基金(2017M613429) 四川省醫(yī)學(xué)科研青年創(chuàng)新課題(Q14005) 成都軍區(qū)總醫(yī)院博士后醫(yī)院管理基金(41732BA)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1

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