【摘要】：背景和目的近年來(lái)磺脲類降糖藥對(duì)骨質(zhì)疏松的影響引起越來(lái)越多學(xué)者的關(guān)注。多項(xiàng)大型臨床研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用不同降糖藥物的患者骨折的發(fā)生率有顯著差異,其中應(yīng)用噻唑烷二酮類藥物者骨折的發(fā)生率最高,胰島素次之,再其次為二甲雙胍,骨折發(fā)生率最低的是應(yīng)用磺脲類降糖藥的患者[1-3]。也有部分研究發(fā)現(xiàn)磺脲類藥物與骨折的發(fā)生無(wú)明顯相關(guān)性[4-6],最近統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,服用不同劑量磺脲類藥物的患者骨折風(fēng)險(xiǎn)反而增加,顯著高于二甲雙胍組[7-8]。關(guān)于磺脲類降糖藥對(duì)骨改建的影響,尚未見(jiàn)國(guó)外相關(guān)研究,而國(guó)內(nèi)馬攀等人[9-11]報(bào)道:磺脲類降糖藥格列美脲可以在高糖環(huán)境下通過(guò)上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(GLUT-1)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4(GLUT-4)的表達(dá)來(lái)促進(jìn)大鼠下頜骨成骨細(xì)胞攝取葡萄糖,并通過(guò)磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路直接促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖和分化,并且可以提高堿性磷酸酶(ALP)的活性以及增加I型膠原蛋白(COL-1)和骨鈣素(OCN)m RNA表達(dá)水平。格列吡嗪和格列喹酮能夠促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖和I型膠原蛋白的表達(dá),抑制其凋亡[12-13]。格列苯脲作為第二代磺脲類降糖藥具有強(qiáng)大的降糖作用,臨床應(yīng)用廣泛,且格列苯脲在國(guó)外常用于糖尿病合并妊娠的患者。本實(shí)驗(yàn)主要探討不同濃度的格列苯脲在高糖環(huán)境下(16.5mmol/l)對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠胚胎成骨細(xì)胞株MC3T3-E1增殖、分化及凋亡的影響。方法經(jīng)不同濃度格列苯脲干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞48小時(shí)后,CCK-8比色法被用來(lái)檢測(cè)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖率,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR)檢測(cè)分化相關(guān)標(biāo)志物I型膠原蛋白(COL-1)和骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)被用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率,利用Western blot法檢測(cè)凋亡蛋白(Bax)和抗凋亡蛋白(Bcl-2)的表達(dá)。結(jié)果1.CCK-8比色法與對(duì)照組相比,隨著格列苯脲濃度的升高,MC3T3-E1細(xì)胞的增殖率逐漸上升,即1μmol/l格列苯脲組,10μmol/l格列苯脲組和20μmol/l格列苯脲組與對(duì)照組相比增殖率依次增加了13.1%、24.2%和31.3%,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究顯示,與對(duì)照組相比,COL-1、OPN m RNA的表達(dá)量隨著一定范圍內(nèi)格列苯脲濃度(1μmol/l,10μmol/l,20μmol/l)的升高而增加(P0.05)。3.流式細(xì)胞檢測(cè)術(shù)MC3T3-E1細(xì)胞的早期凋亡率隨著格列苯脲濃度的升高而逐漸下降,即對(duì)照組、1μmol/l格列苯脲組,10μmol/l格列苯脲組,20μmol/l格列苯脲組的早期凋亡率依次為19.63%,11.20%,7.9%,4.7%,各組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.Western Blot與對(duì)照組相比,隨著格列苯脲濃度的增加,Bcl-2蛋白逐步高表達(dá),Bax蛋白的表達(dá)逐步下降,即Bcl-2/Bax的值呈逐步增大的趨勢(shì)(P0.05)。結(jié)論格列苯脲能夠在高糖環(huán)境下促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖和分化,并抑制其凋亡,且在一定范圍內(nèi),具有濃度依賴性。
[Abstract]:Background and objective in recent years, the effect of sulfonylurea hypoglycemic drugs on osteoporosis has attracted more and more scholars' attention. A number of large clinical studies have found that there are significant differences in the incidence of fracture in patients treated with different hypoglycemic drugs, among which thiazolidinediketone has the highest incidence of fracture, followed by insulin, followed by metformin. The lowest incidence of fracture was in patients treated with sulfonylurea hypoglycemic drugs. Some studies have also found that sulfonylurea drugs have no significant correlation with fracture occurrence [4 鈮，

本文編號(hào)：2483596