【摘要】：目的:目前非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease NAFLD)的發(fā)生日益增加。NAFLD包括從肝臟脂肪變性到脂肪性肝炎,進而發(fā)展為肝臟纖維化,最終至肝硬化的一系列病變。但是目前尚沒有藥物可以治療NAFLD。胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1 GLP-1)是由腸道內(nèi)分泌細胞L細胞分泌的一種重要的腸促胰島素,GLP-1類似物利拉魯肽作為降糖藥物已廣泛的應(yīng)用于臨床,其胰腺外作用是目前糖尿病領(lǐng)域關(guān)注的熱點。GLP-1受體介導(dǎo)的抗臟器纖維化作用已得到初步證實,其機制非常復(fù)雜,在不同的臟器可能存在不同的作用通路,并且一些參與臟器纖維化的關(guān)鍵細胞如肝星狀細胞(hepatic stellate cells HSC)等最有可能參與其中。那么作為肝纖維化的關(guān)鍵細胞HSC上是否存在GLP-1受體的表達呢?本實驗旨在探討GLP-1受體在大鼠HSC是否表達及GLP-1類似物利拉魯肽對高糖條件下大鼠HSC的作用,從而探討其對于NAFLD及肝臟纖維化的作用。方法:1大鼠HSC的培養(yǎng):大鼠HSC復(fù)蘇后接種于無菌塑料培養(yǎng)瓶中,37℃、體積分數(shù)為5%的CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng),培養(yǎng)液為含體積分數(shù)為10%胎牛血清的1640,每天換液1次,48小時后提取樣本于顯微鏡下進行形態(tài)學(xué)鑒定,并進行后續(xù)實驗分析。2 Western法檢測GLP-1受體蛋白在大鼠HSC的表達。3 Real-time PCR法檢測大鼠HSCGLP-1受體m RNA的表達。4分組干預(yù):將培養(yǎng)48小時的大鼠HSC分7組分別為正常糖對照組(5.5mmol/L)、高滲對照組(5.5mmol/L低糖+19.5mmol/L甘露醇)、高糖對照組(25.0mmol/L)、高糖+低濃度利拉魯肽組(50nmol/L)、高糖+中濃度利拉魯肽組(100nmol/L)、高糖+高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)、正常糖+高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)。5 MTS法檢測上述7組細胞的增殖情況。6數(shù)據(jù)分析:所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx?)表示,統(tǒng)計分析運用SPSS 13.0軟件。采用方差分析對各個時間點的7組的光密度(optical density OD)值進行比較,采用Bonferroni法進行兩兩比較,探討同一時間點具體不同的組的差別。對不同時間點的高糖+高濃度利拉魯肽采取配對t檢驗,探討時間對該組OD值得影響。P0.05為統(tǒng)計學(xué)差異有意義。結(jié)果:1大鼠HSC形態(tài)學(xué)鑒定倒置顯微鏡下可以觀察到活化的HSC為扁平狀,胞體大,胞體周圍有突起。2 Western blot及Real-time PCR檢測GLP-1受體均在大鼠HSC上有表達。5個樣本均測得GLP-1受體蛋白及m RNA表達。3 HSC的增殖:高糖組與正常糖組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。高糖+高濃度利拉魯肽干預(yù)組作用48小時、72小時時較高糖對照組增殖降低(p0.05),但高于正常糖對照組(p0.05),高濃度利拉魯肽組(200nmol/L)增殖低于低(50nmol/L)、中(100nmol/L)濃度利拉魯肽組(p0.05),但低、中濃度的利拉魯肽組增殖差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。高滲對照組及正常糖+高濃度利拉魯肽組同正常糖對照組比較增殖差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1大鼠HSC上有GLP-1受體的表達。2高糖可促進大鼠HSC增殖,而利拉魯肽可抑制高糖作用下其增殖,并與其濃度和作用時間緊密相關(guān)。
[Abstract]:Objective: To study the increasing of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). NAFLD includes a range of pathological changes from hepatic steatosis to steatohepatitis, further developing to liver fibrosis, and ultimately to cirrhosis. However, no drug can be used to treat NAFLD at present. Glucagon-like peptide-1GLP-1 is an important intestinal proinsulin, which is secreted by the L-cells of the intestinal endocrine cell. The mechanism of anti-organ fibrosis mediated by GLP-1 receptor has been proved. The mechanism is very complicated. There may be different pathways in different organs, and some of the key cells involved in organ fibrosis, such as hepatic stellate cells (HSC), may be involved. Is there a GLP-1 receptor expression on the key cell HSC as a liver fibrosis? The purpose of this study was to investigate the expression of GLP-1 receptor in rat HSC and the effect of GLP-1 analog liraglutide on HSC in rats with high glucose, so as to study the effect of GLP-1 receptor on NAFLD and hepatic fibrosis. Method:1 rat HSCs were cultured: the rat HSC was recovered and then inoculated into a sterile plastic culture flask, and the culture medium was 1640 with a volume fraction of 10% fetal bovine serum in a CO2 saturated humidity incubator with a volume fraction of 5% at 37 & deg; C. The expression of the rat HSCGLP-1 receptor m RNA was detected by the real-time PCR method. The rats were divided into normal sugar control group (5.5 mmol/ L), hypertonic control group (5.5 mmol/ L low-sugar + 19.5 mmol/ L mannitol), high-sugar control group (25.0 mmol/ L), high-sugar + low-concentration liraglutide group (50 nmol/ L) and high-sugar + medium-concentration liraglutide group (100 nmol/ L), respectively. The proliferation of the above-mentioned 7-group cells was detected by high-glucose + high-concentration liraglutide (200 nmol/ L), normal sugar + high-concentration liraglutide (200 nmol/ L).5 MTS assay. ) SPSS 13.0 software was used for statistical analysis. The optical density OD values of 7 groups of time points were compared by analysis of variance, and the difference of different groups at the same time was discussed by using the Bonferroni method. The paired t-test was carried out on the high-glucose + high-concentration liraglutide at different time points, and the effect of time on the set OD was discussed. The difference of P0.05 was significant. Results: The expression of GLP-1 receptor and the expression of m-RNA were measured by Western blot and Real-time PCR. The difference between the high-sugar group and the normal sugar group was statistically significant (p0.05). The proliferation of high-glucose + high-concentration liraglutide was decreased (p0.05) at 48 h and 72 h, but higher than that of normal sugar control group (p0.05), and the proliferation of high-concentration liraglutide group (200 nmol/ L) was lower than that of low (50 nmol/ L), medium (100 nmol/ L) concentration of liraglutide (p0.05), but low, There was no significant difference in the proliferation of the liraglutide group at medium concentration (p0.05). There was no significant difference in the proliferation of the high-permeability control group and the normal sugar + high-concentration liraglutide group compared with the normal sugar control group (p0.05). Conclusion:1. The expression of GLP-1 receptor in rat HSC can promote the proliferation of HSC in rat, and the liraglutide can inhibit the proliferation of HSC, and it is closely related to its concentration and time of action.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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本文編號：2477630