發(fā)布時間：2019-05-08 08:43

【摘要】：目的:探討卵泡刺激素β亞基(follicle-stimulating hormoneβ,FSHβ)對骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)誘導小鼠胚胎成纖維細胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)成骨分化中的作用。方法:采用Ad Easy系統(tǒng)構(gòu)建表達綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)、FSHβ和BMP9的重組腺病毒(Ad-GFP、Ad-FSHβ和Ad-BMP9),實驗分組為:AdGFP組、Ad-BMP9組、Ad-FSHβ組和Ad-BMP9+Ad-FSHβ組。運用化學發(fā)光定量和組織化學染色法分別檢測各組3、5、7 d堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;Western blot檢測成骨分化早期轉(zhuǎn)錄因子(Runx2和DLX5)的蛋白表達水平;RT-PCR檢測成骨分化晚期指標骨鈣蛋白(osteocalcin,OCN)和骨橋蛋白(osteopontin,OPN)的m RNA表達水平;茜素紅染色檢測鈣鹽沉積;流式細胞技術(shù)檢測各實驗組細胞的周期分布。結(jié)果:在MEFs中,過表達FSHβ能明顯促進BMP9誘導MEFs骨化過程中第3天(6 874.67±224.93 vs.11 935.67±568.76,P=0.000)、第5天(43 434.67±2 047.57 vs.98 913.33±4 606.26,P=0.000)、第7天(38 198.00±2 376.43 vs.78 534.67±2 114.56,P=0.000)的ALP活性,轉(zhuǎn)錄因子Runx2(1.171±0.105 vs.1.350±0.053,P=0.026)、DLX5(1.382±0.123 vs.1.738±0.286,P=0.001)和晚期成骨指標OCN(1.300±0.045 vs.1.471±0.046,P=0.002)、OPN(1.300±0.084 vs.1.479±0.038,P=0.016)的表達水平,以及鈣鹽沉積。此外,FSHβ和(或)BMP9對MEFs細胞周期沒有明顯影響(G1期:F=0.226,P=0.876;G2期:F=0.147,P=0.929;S期:F=0.027,P=0.994)。結(jié)論:在不影響MEFs細胞周期的情況下,FSHβ協(xié)同BMP9誘導MEFs成骨分化。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of follicle-stimulating hormone 尾 (FSH 尾) on osteoblastic differentiation of mouse embryonic fibroblasts (mouse embryonic fibroblasts,MEFs) induced by bone morphogenetic protein 9 (BMP 9). Methods: recombinant adenoviruses (Ad-GFP,Ad-FSH 尾 and Ad-BMP9) expressing green fluorescent protein (green fluorescent protein,GFP), FSH 尾 and BMP9 were constructed by Ad Easy system. The experimental groups were AdGFP group, Ad-BMP9 group, Ad-FSH 尾 group and Ad-BMP9 Ad-FSH 尾 group. The recombinant adenoviruses were divided into three groups: AdGFP group, Ad-BMP9 group, Ad-FSH 尾 group and Ad-BMP9 Ad-FSH 尾 group. The protein expression levels of transcription factors (Runx2 and DLX5) in the early stage of osteogenic differentiation were detected by chemiluminescence quantitative analysis and histochemistry staining, respectively. Alkaline phosphatase (alkaline phosphatase,ALP) activity; Western blot was used to detect the expression of transcription factors (Runx2 and DLX5) in the early stage of osteogenic differentiation. RT-PCR was used to detect the expression of bone troponin (osteocalcin,OCN) and osteopontin (osteopontin,OPN) in the late osteogenic differentiation stage, alizarin red staining was used to detect calcium salt deposition, and flow cytometry was used to detect the cell cycle distribution in each experimental group. Results: in MEFs, overexpression of FSH 尾 significantly promoted BMP9 induced MEFs ossification on the 3rd day (6 874.67 鹵224.93 vs.11 935.67 鹵568.76, P < 0 000) and the fifth day (43 434.67 鹵2 047.57 vs.98 913.33 鹵4 606.26, P < 0 000). On the 7th day, ALP activity, transcription factor Runx2 (1.171 鹵0.105 vs.1.350 鹵0.053, P < 0.01), DLX5 (1.382 鹵0.123 vs.1.738 鹵0.286), ALP activity (38 198.00 鹵2 376.43 vs.78 534.67 鹵2 114.56, P < 0.05), and transcription factor Runx2 (1.171 鹵0.105 vs.1.350 鹵0.053, P < 0.05), DLX5 (1.382 鹵0.123 vs.1.738 鹵0.286) were detected. OCN (1.300 鹵0.045 vs.1.471 鹵0.046, 0.002), OPN (1.300 鹵0.084 vs.1.479 鹵0.038, P = 0.016) and calcium deposition. In addition, FSH 尾 and / or BMP9 had no significant effect on the cell cycle of MEFs (G1: F = 0.226, P = 0.876 / G _ 2: F = 0.147, P = 0.929 / S: F = 0.027, P = 0.994). Conclusion: without affecting the cell cycle of MEFs, FSH 尾 combined with BMP9 can induce osteoblastic differentiation of MEFs.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院生殖健康與不孕癥中心;
【基金】：重慶市科學技術(shù)委員會資助項目(編號:cstc2012jj A10113)
【分類號】：R580

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本文編號：2471768