【摘要】：研究背景2型糖尿病是胰島β細(xì)胞的功能障礙和外周組織的胰島素抵抗為主要特征的一類(lèi)代謝性疾病。長(zhǎng)期高血糖對(duì)胰島細(xì)胞的胰島素合成、分泌以及存活等均產(chǎn)生不利的影響,其中涉及多種機(jī)制,包括體內(nèi)鈣離子平衡的破壞[1]。鈣離子平衡的紊亂對(duì)胰島β細(xì)胞生長(zhǎng)/功能和胰島素分泌信號(hào)通路均會(huì)產(chǎn)生抑制作用[2]。Mibefradil作為選擇性T型鈣通道拮抗劑,對(duì)T型鈣離子通道的阻滯效應(yīng)約為其對(duì)L型鈣離子通道阻滯效應(yīng)的30-100倍,最早作為抗心絞痛、降壓藥物應(yīng)用于臨床,目前該藥物廣泛用于腫瘤、疼痛、癲癇等方面的研究,在糖尿病方面研究尚不深入。T型鈣通道是低電壓激活鈣離子通道,該通道僅需一個(gè)較低的電壓(約-70mv)即可被激活,因此是唯一一類(lèi)允許鈣離子在膜靜息電位內(nèi)流的通道[3]。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn)T型鈣通道在db/db小鼠(2型糖尿病模型小鼠,瘦素受體自發(fā)突變導(dǎo)致極度肥胖、多食、消渴、多尿等)肝臟、腦組織中表達(dá)明顯高于野生型小鼠,Mibefradil可明顯降低db/db小鼠的血糖及血脂水平,但對(duì)正常小鼠則無(wú)明顯作用[4]。迄今為止,T型鈣通道特別是Mibefradil在胰島β細(xì)胞中的作用仍不清楚。因此本研究擬將高糖培養(yǎng)大鼠胰島素瘤細(xì)胞株(INS-1)作為研究對(duì)象,高糖培養(yǎng)細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞高糖模型,Mibefradil干預(yù)INS-1細(xì)胞,采用NNC 55-0396(NNC,僅拮抗T型鈣離子通道)、尼卡地平(Nic,僅拮抗L型鈣離子通道)作為對(duì)照藥物,觀察藥物對(duì)INS-1細(xì)胞凋亡、胰島素分泌的作用,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步觀察其對(duì)INS-1細(xì)胞T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基表達(dá)的作用,以期初步探討Mibefradil對(duì)INS-1細(xì)胞功能的作用及其可能的機(jī)制。方法:本課題將INS-1細(xì)胞作為研究對(duì)象,利用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖確定最佳高糖及藥物(Mibefradil、NNC 55-0396、尼卡地平)作用濃度及時(shí)間后,高濃度葡萄糖(33.3mmol/L)處理細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞高糖模型。將細(xì)胞分為正常培養(yǎng)組、高糖組、藥物組、高糖+藥物組,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡、放射免疫法檢測(cè)細(xì)胞胰島素分泌,以觀察藥物對(duì)INS-1細(xì)胞凋亡及胰島素分泌的作用,RT-PCR、Western-Blot檢測(cè)T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基基因及蛋白表達(dá)觀察藥物對(duì)其表達(dá)的作用。主要結(jié)果:1.較正常培養(yǎng)組,33.3mmol/L葡萄糖孵育細(xì)胞72h時(shí),顯著抑制細(xì)胞增殖(P0.05);1μmol/L Mibefradil、1μmol/L NNC 55-0396、10μmol/L尼卡地平作用24小時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)明顯抑制(P0.05),在此基礎(chǔ)上增加藥物濃度或延長(zhǎng)作用時(shí)間均可顯著抑制細(xì)胞增殖(P0.05)。2.較正常培養(yǎng)組,高糖組細(xì)胞凋亡明顯增加(P0.05);較高糖培養(yǎng)組,高糖+Mibefraidl組、高糖+NNC 55-0396組、高糖+尼卡地平組以及高糖+NNC 55-0396+尼卡地平組細(xì)胞凋亡無(wú)顯著差異(P0.05)。3.較正常培養(yǎng)組,藥物組細(xì)胞基礎(chǔ)胰島素分泌(3.3mmol/L葡萄糖刺激)及葡萄糖刺激胰島素分泌(16.7mmol/L葡萄糖刺激)均無(wú)顯著差異(P0.05)。較高糖組,只有高糖+Mibefradil組顯著降低細(xì)胞胰島素分泌(基礎(chǔ)分泌以及葡萄糖刺激胰島素分泌)(P0.05)。4.1)高糖(33.3mmol/L)作用于INS-1細(xì)胞72小時(shí)顯著升高cav3.1、cav3.2亞基基因及蛋白表達(dá)(P0.05)。2)與正常培養(yǎng)組相比,Mibefradil組T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基的基因及蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異(P0.05);而與高糖培養(yǎng)組相比,高糖+Mibefrail組顯著降低T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基的基因及蛋白表達(dá)(P0.05)。主要結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)中Mibefradil、NNC 55-0396、尼卡地平對(duì)高糖誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞凋亡無(wú)明顯保護(hù)作用。2.Mibefradil可顯著抑制高糖作用下INS-1細(xì)胞胰島素分泌,同時(shí)對(duì)正常培養(yǎng)的INS-1細(xì)胞無(wú)此作用;3.高糖可增加INS-1細(xì)胞中T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基基因及蛋白表達(dá);4.Mibefradil可顯著抑制高糖培養(yǎng)下INS-1細(xì)胞T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基的基因及蛋白表達(dá),而對(duì)正常培養(yǎng)的INS-1細(xì)胞無(wú)明顯作用。上述結(jié)果提示Mibefradil對(duì)正常培養(yǎng)下INS-1細(xì)胞胰島素分泌以及cav3.1、cav3.2亞基基因及蛋白表達(dá)均無(wú)明顯作用,僅降低高糖培養(yǎng)下INS-1細(xì)胞胰島素分泌、T型鈣通道cav3.1、cav3.2亞基表達(dá),提示Mibefraidl可能通過(guò)拮抗T型鈣通道抑制高糖作用下INS-1細(xì)胞胰島素分泌,為深入研究T型鈣通道及Mibefradil在2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用提供基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1

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10 朱紅霞;易本誼;劉精東;陳勇;曾竹青;曾黎峰;;血糖調(diào)節(jié)異常及初診2型糖尿病患者早期相胰島素分泌及其組分的變化[A];江西省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

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6 日聞;日本：發(fā)現(xiàn)抑制胰島素分泌的蛋白質(zhì)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

7 何德功;日學(xué)者發(fā)現(xiàn)有關(guān)胰島素分泌的關(guān)鍵蛋白質(zhì)[N];經(jīng)濟(jì)參考報(bào);2003年

8 鐘燕;健康吃夜宵[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

9 《糖尿病周刊》記者 王海寧;當(dāng)心早相胰島素分泌異常[N];健康時(shí)報(bào);2008年

10 董飛俠;糖尿病病因的7個(gè)“一點(diǎn)”[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

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本文編號(hào)：2462864