【摘要】：研究背景：糖尿病是一種多因素疾病,其血管并發(fā)癥是糖尿病患者致殘致死的主要原因[1]。糖尿病患者的血管床長(zhǎng)期暴露在高糖的環(huán)境中是導(dǎo)致其血管發(fā)生病理改變的最主要原因。在高糖的環(huán)境中,葡萄糖和其他還原糖類與蛋白質(zhì)的游離氨基可進(jìn)行非酶促反應(yīng),導(dǎo)致了晚期糖基化終產(chǎn)物(Advanced Glycation End products,AGEs)的加速形成[2]。有大量的研究證明AGEs的過(guò)量產(chǎn)生以及在血管中的過(guò)量累積會(huì)導(dǎo)致和促進(jìn)糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展[3]。另外,血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙是糖尿病血管病變?cè)缙陔A段的重要特點(diǎn),內(nèi)皮細(xì)胞受損將會(huì)導(dǎo)致血管舒張障礙、血管滲透性增加和血栓形成等一系列的有害影響,有研究發(fā)現(xiàn)在糖尿病病人的動(dòng)脈粥樣硬化損傷處可觀察到血管內(nèi)皮發(fā)生了內(nèi)皮/間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(Endothelial to Mesenchymal Transdifferentiation,EnMT),血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)作為內(nèi)皮細(xì)胞特征性的標(biāo)志物,其表達(dá)會(huì)下降,而間質(zhì)細(xì)胞的特征性標(biāo)志物平滑肌肌動(dòng)蛋白-α (α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)的表達(dá)會(huì)增加是其重要特點(diǎn)[4],EnMT可導(dǎo)致血管纖維化,血管彈性下降,引發(fā)各種血管疾病,而AGEs是否參與EnMT的發(fā)生,目前尚未有研究證實(shí)。因此,本研究擬通過(guò)兩部分實(shí)驗(yàn)來(lái)探明AGEs是否參與EnMT的發(fā)生,從而為糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制提供一個(gè)新的研究方向。研究目的：實(shí)驗(yàn)一：觀察糖尿病病人和健康人體內(nèi)血清AGEs、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子p(Transforming Growth Factor-β,TGF-β1).金屬基質(zhì)蛋白酶-9(Metal Matrix Protease,MMP-9)以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)的水平及其相關(guān)性；實(shí)驗(yàn)二：觀察經(jīng)AGEs刺激后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)標(biāo)志物的表達(dá)情況。研究方法：(1)實(shí)驗(yàn)一：選取40名2型糖尿病病人與40名健康體檢者,收集全部受試者的血清,用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測(cè)其中AGEs、TGF-β、MMP-9以及VEGF的含量,結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；(2)實(shí)驗(yàn)二：將體外培養(yǎng)的HUVECs細(xì)胞株分為兩組,分別加入AGEs作為實(shí)驗(yàn)組和牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)作為對(duì)照組,培養(yǎng)7天后收集細(xì)胞提取總蛋白,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)檢測(cè)兩組HUVECs中α-SMA和vWF的表達(dá)情況,結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。研究結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一：(1)2型糖尿病病人體內(nèi)的血清AGEs、MMP-9、TGF-β1以及VEGF的水平均高于健康體檢者(P0.01,P0.01,P0.05,P0.01)；(2) Pearson相關(guān)分析顯示：2型糖尿病病人血清AGEs的水平與VEGF(r=0.642, P=0.000)、MMP-9 (r=0.946,P=0.000)、TGF-β1(r=0.786,P=0.000)的水平均呈正相關(guān)關(guān)系；(3)一元線性回歸分析顯示：2型糖尿病病人血清AGEs的水平是影響VEGF、MMP-9、TGF-β1水平的獨(dú)立因素。實(shí)驗(yàn)二：與BSA對(duì)照組相比,HUVECs經(jīng)AGE-BSA處理7天后,α-SMA表達(dá)增強(qiáng),vWF表達(dá)降低(P0.05)。研究結(jié)論：實(shí)驗(yàn)一：2型糖尿病病人體內(nèi)的一些與EnMT相關(guān)聯(lián)的因子(MMP-9、TGF-β1、 VEGF),其水平均高于健康體檢者,且AGEs與這些因子關(guān)系密切,AGEs的升高可引起這些因子的水平升高；實(shí)驗(yàn)二：AGEs可誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化,這種血管內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化機(jī)制可能參與糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 申紅遠(yuǎn);白靜;湯U，

本文編號(hào)：2385526