發(fā)布時(shí)間：2018-12-10 06:50

【摘要】：研究目的:β細(xì)胞凋亡是2型糖尿病發(fā)生及進(jìn)展的重要病理因素。胰高糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)是近年應(yīng)用于臨床的新型降糖藥物,研究證實(shí)顯示GLP-1受體激動(dòng)劑(GLP-1 receptor agonist,GLP-1Ra)有抑制β細(xì)胞凋亡的作用,然而具體機(jī)制目前尚未完全明確。因此,本研究的目的是通過臨床部分明確GLP-1Ra對(duì)肥胖的2型糖尿病(Type 2 Diabetes,T2DM)患者血糖及胰島功能的影響,并觀察對(duì)患者糖脂代謝的影響;進(jìn)一步建立T2DM大鼠模型,通過高糖鉗夾評(píng)估大鼠胰島β細(xì)胞分泌功能,并檢測AMPKα及NOX2-ROS-JNK信號(hào)通路及凋亡蛋白在胰島及胰腺組織的表達(dá),初步探討GLP-1Ra對(duì)大鼠胰島β細(xì)胞的影響及可能機(jī)制;應(yīng)用INS-1細(xì)胞系,結(jié)合特異性的信號(hào)通路抑制劑,進(jìn)一步探討GLP-1Ra是否通過AMPKα-NOX2-ROS-JNK信號(hào)通路抑制β細(xì)胞凋亡。內(nèi)容與方法:第一部分臨床試驗(yàn)觀察GLP-1Ra對(duì)肥胖的T2DM患者胰島功能的影響;根據(jù)入組及排除標(biāo)準(zhǔn)在我院門診連續(xù)入組35例肥胖的T2DM患者,給予GLP-1Ra治療12周(第1周0.6mg/d,2-12周1.2mg/d)。1.觀察GLP-1Ra對(duì)患者一般情況、血糖、生化指標(biāo)的影響;2.行口服葡萄糖耐量及C肽釋放試驗(yàn),應(yīng)用穩(wěn)態(tài)模型計(jì)算HOMA2-IR及HOMA2-%β指數(shù),評(píng)估GLP-1Ra對(duì)胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)及胰島β細(xì)胞功能指數(shù)的影響。第二部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察GLP-1Ra對(duì)T2DM大鼠β細(xì)胞分泌功能的影響,并觀察對(duì)氧化應(yīng)激及相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的影響應(yīng)用雄性SD大鼠建立T2DM動(dòng)物模型,將動(dòng)物分3組:對(duì)照組、糖尿病組、GLP-1Ra治療組(GLP-1組),每組12只,觀察12周。1.觀察GLP-1Ra對(duì)大鼠的行為、體重、進(jìn)食量、血糖及生化指標(biāo)的影響;2.進(jìn)行高葡萄糖鉗夾,酶聯(lián)免疫吸附法測定各組大鼠胰島素水平;3.HE及免疫熒光雙重染色觀察GLP-1Ra對(duì)T2DM大鼠胰島組織形態(tài)學(xué)及α、β比值的影響;4.TUNEL法、免疫組織化學(xué)及Western blot觀察GLP-1Ra對(duì)胰島及胰腺組織凋亡的影響;5.DCFH-DA熒光探針檢測GLP-1Ra對(duì)胰島活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)的影響;6.免疫組化及Western blot觀察GLP-1Ra對(duì)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白AMPKα-NOX2-JNK1/2水平的影響。第三部分細(xì)胞實(shí)驗(yàn)應(yīng)用INS-1細(xì)胞系給予GLP-1Ra及特異性NOX2及JNK抑制劑,干預(yù)48h,探討GLP-1Ra是否通過AMPKα-NOX2-ROS-JNK信號(hào)通路抑制β細(xì)胞凋亡;1.應(yīng)用Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)及Western blot檢測GLP-1Ra對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;2.DCFH-DA熒光探針檢測GLP-1Ra對(duì)ROS產(chǎn)生的影響;3.Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)NOX2、AMKPα、p-AMKPα、JNK1/2、p-JNK1/2、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)水平;結(jié)果:第一部分1.GLP-1Ra治療12周后患者的,FBG、P2BG及HbA1c均明顯下降;sFCP、HOMA2-%β升高,HOMA2-IR下降。2.GLP-1Ra治療后患者的體重、BMI、SBP、DBP、TG及TC均下降,HDL-c升高。第二部分1.T2DM動(dòng)物模型成模率91.7%,N組、T2DM組及GLP-1組死亡率分別為8.3%、27.3%、18.2%,死亡率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.GLP-1Ra治療后T2DM大鼠毛色、行為改善,日均進(jìn)食量低于T2DM組,而體重較T2DM組恢復(fù);3.GLP-1Ra治療組大鼠的周平均血糖及Hb A1c以及膽固醇水平均低于T2DM組,但仍高于N組;4.GLP-1Ra治療組大鼠的GIR及胰島一相、二相胰島素分泌均明顯高于T2DM組,但未恢復(fù)至N組水平;5.HE結(jié)果顯示GLP-1Ra治療組T2DM大鼠的胰島組織形態(tài)改善,免疫熒光結(jié)果顯示胰島素?zé)晒庵翟黾?胰高糖素下降,α、β細(xì)胞比值下降;6.TUNEL、免疫組化及Western blot結(jié)果均顯示GLP-1治療后胰島及胰腺組織凋亡率較T2DM組明顯下降;7.經(jīng)GLP-1以及給予特異性NADPH氧化酶NOX2(gp91phox)抑制劑Apocynin(加拿大麻素或夾竹桃麻素)后胰島ROS水平明顯降低;8.免疫組化結(jié)果顯示T2DM組大鼠胰島p-AMKPα表達(dá)下降,而NOX2及p-JNK1/2表達(dá)水平升高,GLP-1Ra治療后p-AMKPα升高,NOX2及p-JNK1/2均下降。Western blot檢測胰腺組織中的結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致;第三部分1.AnnexinⅤ/PI雙染流式細(xì)胞儀及Western blot檢測均顯示GLP-1Ra能顯著抑制高糖誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞凋亡;2.高糖誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞中NOX2蛋白水平明顯升高,給予GLP-1或特異性抑制劑處理后,能明顯抑制NOX2蛋白水平,兩者聯(lián)合應(yīng)用后NOX2水平未見進(jìn)一步下降;3.高糖可誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯升高,給予GLP-1Ra或特異性NOX2抑制劑后,ROS生成減少,同時(shí)聯(lián)合應(yīng)用抑制劑及GLP-1后ROS水平未見進(jìn)一步下降;4.高糖誘導(dǎo)p-AMKPα表達(dá)減少,p-JNK1/2增加,給予GLP-1Ra干預(yù)后p-AMKPα表達(dá)增加,單用GLP-1或特異性JNK抑制劑后p-JNK1/2表達(dá)水平下降,細(xì)胞凋亡減少,兩者聯(lián)合后抑制作用未見明顯增加。結(jié)論:1.臨床試驗(yàn)顯示GLP-1Ra能顯著改善肥胖的T2DM患者的糖代謝,并能改善患者的β細(xì)胞功能和胰島素抵抗。2.動(dòng)物及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,GLP-1Ra治療能改善T2DM大鼠胰島一相、二相分泌及組織形態(tài)學(xué),降低α/β細(xì)胞比值,并能顯著降低胰島及β細(xì)胞的凋亡,AMPKα-NOX2-ROS-JNK信號(hào)通路可能是GLP-1Ra抑制β細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 袁濤;1型糖尿病和β細(xì)胞凋亡[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;2002年01期

2 惠曉麗,王惠芳,姚孝禮;β細(xì)胞凋亡與2型糖尿病[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;2005年01期

3 肖俊霞,尹衛(wèi)東;β細(xì)胞凋亡與2型糖尿病[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2004年13期

4 馮家p，

本文編號(hào)：2370150