【摘要】：目的：探討下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子7類似物2(Transcription factor 7-like 2, TCF7L2)對胰島素抵抗(Insulin resistance, IR) HepG2細胞胰島素降解酶(Insulin degrading enzyme, IDE)表達的調(diào)控及可能機制。方法：細胞分組,將HepG2細胞分為空白組、TCF7L2干擾組、空載體組、IR組、IR+TCF7L2干擾組、IR+空載體組。采用高濃度胰島素(5×10-6mol/L)持續(xù)作用24h誘導IR模型(IR-HepG2細胞)生成。以人TCF7L2 mRNA編碼序列作為干擾靶點構建TCF7L2特異性小干擾RNA慢病毒載體(LV-TCF7L2-siRNA)轉(zhuǎn)染空白組及IR組細胞,空載體病毒轉(zhuǎn)染空載體組及IR+空載體組細胞。qRT-PCR法檢測各組細胞TCF7L2及IDE mRNA的表達,Western blotting檢測各組細胞TCF7L2、IDE、胰島素刺激后蛋白激酶B (p-AKT)蛋白表達的變化,流式細胞術檢測各組2-脫氧-D-葡萄糖(2-NBDG)熒光葡萄糖攝取率。結(jié)果：與空白組比較,IR組細胞葡萄糖消耗量及2-NBDG攝取率均明顯降低(P0.01),證明IR細胞模型建立成功。qRT-PCR及Western blotting結(jié)果顯示,R組TCF7L2及IDE mRNA及蛋白表達水平均明顯低于空白組(P0.05),TCF7L2干擾組TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表達水平較空白組、空載體組均明顯下降,IR+TCF7L2干擾組TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表達水平較IR組、IR+空載體組均明顯下降(P0.05)。生理劑量胰島素刺激后,IR組、IR+TCF7L2干擾組p-AKT蛋白水平較空白組明顯下降(P0.01),各組總AKT水平差異無統(tǒng)計學差異(P0.05). TCF7L2干擾組2-NBDG熒光葡萄糖攝取率較空白組和空載體組明顯下降,IR+TCF7L2干擾組2-NBDG熒光葡萄糖攝取率較IR組、IR+空載體組明顯下降(P0.01)。結(jié)論：TCF7L2可通過調(diào)控IDE表達致肝細胞IR,其機制可能與減少胰島素信號通路關鍵酶p-AKT蛋白表達有關。
[Abstract]:Aim: to investigate the regulation and possible mechanism of down-regulated transcription factor 7 analogue 2 (Transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) on the expression of insulinase (Insulin degrading enzyme, IDE) in insulin-resistant (Insulin resistance, IR) HepG2 cells. Methods: HepG2 cells were divided into blank group, TCF7L2 interference group, empty carrier group, IR TCF7L2 interference group and IR empty carrier group. IR model (IR-HepG2 cells) was induced by high concentration of insulin (5 脳 10-6mol/L) for 24 h. TCF7L2 specific small interfering RNA lentivirus vector (LV-TCF7L2-siRNA) was constructed with human TCF7L2 mRNA coding sequence as the interference target, and transfected into blank group and IR group. The expression of TCF7L2 and IDE mRNA was detected by qRT-PCR method, and the expression of protein kinase B (p-AKT) protein after insulin stimulation of TCF7L2,IDE, was detected by, Western blotting. Fluorescence glucose uptake rate of 2-deoxy-D-glucose (2-NBDG) was detected by flow cytometry. Results: compared with the blank group, the glucose consumption and 2-NBDG uptake rate in IR group were significantly decreased (P0.01), which proved that the IR cell model was established successfully. The results of qRT-PCR and Western blotting showed that there was no significant difference between the two groups. The expression levels of TCF7L2, IDE mRNA and protein in group R were significantly lower than those in control group (P0.05). The expression level of TCF7L2,IDE mRNA and protein in TCF7L2 interference group was significantly lower than that in blank group, and the expression level of TCF7L2,IDE mRNA and protein in IR TCF7L2 interference group was significantly lower than that in IR group. IR empty carrier group were significantly decreased (P0.05). After insulin stimulation, the p-AKT protein level in IR group and IR TCF7L2 interference group was significantly lower than that in blank group (P0.01). There was no significant difference in total AKT level in each group (P0.05). The fluorescence glucose uptake rate of 2-NBDG in TCF7L2 interference group was significantly lower than that in blank group and empty carrier group, 2-NBDG fluorescence glucose uptake rate in IR TCF7L2 interference group was significantly lower than that in IR group, and that in IR empty carrier group was significantly lower (P0.01). Conclusion: TCF7L2 may regulate the expression of IDE and induce IR, in hepatocytes. The mechanism may be related to the reduction of the expression of p-AKT, a key enzyme of insulin signaling pathway.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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本文編號：2348069