【摘要】：目的研究雷帕霉素(RAPA)對腎小管上皮細胞生物學行為的影響及其治療糖尿病腎病分子機制。方法體外培養(yǎng)腎小管上皮細胞(HK-2),使用轉化生長因子β1(TGF-β1)處理HK-2細胞,以建立腎小管上皮細胞-肌成纖維細胞轉化(EMT)的細胞模型,并聯(lián)合RAPA處理HK-2細胞,通過Transwell遷移實驗和侵襲實驗觀察HK-2細胞的遷移和侵襲等細胞生物學行為變化;通過RT-PCR、Western blot法觀察EMT分子標志物表達的變化;結合前期建立的糖尿病腎病小鼠模型的腎組織及通過腹腔注射RAPA[1mg/(kg·d)]處理后的模型小鼠腎組織,利用HE染色分析腎組織的病理變化;利用免疫組化檢測EMT分子標志物的表達變化。結果 Transwell實驗結果表明,TGF-β1誘導HK-2細胞發(fā)生遷移和侵襲能力明顯增加;聯(lián)合應用RAPA后,遷移和侵襲能力明顯抑制。RT-PCR、Western blot和免疫組化結果顯示TGF-β1可以促進間質細胞標志分子Vimentin的表達,而上皮標志分子E-cadherin的表達明顯降低;聯(lián)合應用RAPA后可以抑制TGF-β1誘發(fā)的EMT作用。HE染色顯示,RAPA治療后,能顯著改善糖尿病腎病小鼠腎小管形態(tài)病變。結論 RAPA具有抑制腎小管上皮細胞發(fā)生EMT作用。
[Abstract]:Objective to study the effect of rapamycin (RAPA) on the biological behavior of renal tubular epithelial cells and its molecular mechanism in the treatment of diabetic nephropathy. Methods Renal tubular epithelial cells (HK-2) were cultured in vitro and HK-2 cells were treated with transforming growth factor 尾 1 (TGF- 尾 1) to establish a cell model of transforming (EMT) from renal tubular epithelial cells to myofibroblasts. HK-2 cells were treated with RAPA, and the changes of cell biological behavior such as migration and invasion of HK-2 cells were observed by Transwell migration assay and invasion assay. The expression of EMT molecular markers was observed by RT-PCR,Western blot method. Combined with the kidney tissue of diabetic nephropathy model and the kidney tissue treated by intraperitoneal injection of RAPA [1mg/ (kg d)], the pathological changes of renal tissue were analyzed by HE staining. The expression of EMT molecular markers was detected by immunohistochemistry. Results the results of Transwell assay showed that TGF- 尾 1 induced the migration and invasion of HK-2 cells. After combined application of RAPA, migration and invasion were significantly inhibited. RT-PCR,Western blot and immunohistochemical results showed that TGF- 尾 1 could promote the expression of Vimentin, but the expression of epithelial marker E-cadherin was significantly decreased. Combined use of RAPA could inhibit EMT induced by TGF- 尾 1. HE staining showed that RAPA could significantly improve renal tubular morphology in diabetic nephropathy mice. Conclusion RAPA can inhibit the development of EMT in renal tubular epithelial cells.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學生物化學與分子生物學教研室;安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院藥劑科;安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院腎臟內科;
【基金】：國家自然科學基金(編號:81372911)
【分類號】：R587.2;R692.9

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本文編號：2311610