【摘要】：第一章自噬在強直性脊柱炎外周關(guān)節(jié)異位骨化作用機制研究目的:1.與乆窩囊腫(popliteal cyst,PC)滑膜組織及細(xì)胞比較,自噬標(biāo)志物L(fēng)C3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、P62在強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)外周病變關(guān)節(jié)滑膜組織、滑膜成纖維細(xì)胞(synovium fibroblast,SF)中是否升高;2.調(diào)節(jié)AS外周病變關(guān)節(jié)SF的自噬水平后其成骨功能是否改變。方法:1.實驗設(shè)計與分組滑膜組織分組為:AS病變關(guān)節(jié)、PC。SF分組為:PC、AS病變關(guān)節(jié)、與自噬調(diào)節(jié)劑共培養(yǎng)的AS病變關(guān)節(jié)。檢測不同組的成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及 LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、P62 蛋白。2.實驗內(nèi)容2.1免疫組化檢測滑膜組織中ALP、LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、P62。2.2膠原酶消化法提取SF。2.3流式細(xì)胞技術(shù)檢測CD55、CD90、CD14,明確SF純度。2.4 MTT檢測各組的SF增殖能力及自噬調(diào)節(jié)劑對其的毒性檢測。2.5自噬調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)AS病變關(guān)節(jié)的SF自噬水平,蛋白印跡技術(shù)(western blotting,WB)檢測各組細(xì)胞的 ALP、LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、P62。3.統(tǒng)計分析將實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件,單因素方差分析進行檢驗。P0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.AS滑膜組織ALP、LC3、Beclin1較PC滑膜組織明顯升高,有統(tǒng)計學(xué)差異;P62表達(dá)情況相反,但沒有統(tǒng)計學(xué)差異。2.AS、PC滑膜細(xì)胞中的SF比率無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,且都占95%以上。3.AS病變關(guān)節(jié)SF增殖能力最強,加用3-甲基腺嘌共培養(yǎng)的AS的SF增殖能力其次,PC的SF增殖能力最低,三者增殖能力之間存在顯著性差異。7mmol/l的3-甲基腺嘌呤對AS的SF無明顯細(xì)胞毒性的最大濃度。4.AS 的 SF 所表達(dá)的 ALP、LC3Ⅱ、Beclin1、LC3Ⅱ 與 LC3Ⅰ 的比值與 PC 的 SF所表達(dá)的量存在顯著性差異,前者高于后者;運用3-甲基腺嘌呤共培養(yǎng)的AS的SF與未使用3-甲基腺嘌呤共培養(yǎng)的AS的SF所表達(dá)的自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1、LC3Ⅱ與LC3Ⅰ的比值及ALP之間也存在顯著性差異,前者低于后者,且使用3-甲基腺嘌呤共培養(yǎng)的AS的SF隨著共培養(yǎng)時間延長自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1、LC3Ⅱ與LC3Ⅰ的比值及ALP呈下降趨勢,且組間存在顯著性差異;P62表達(dá)量雖然隨著自噬抑制劑使用時間延長在AS的SF內(nèi)表達(dá)量升高,但在各組之間未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。結(jié)論:1.AS病變關(guān)節(jié)滑膜中及SF中自噬水平升高。2.自噬可以正向調(diào)節(jié)AS病變關(guān)節(jié)異位骨化。第二章自噬與與股骨頭壞死滑膜病變的研究目的:檢測股骨頭壞死(osteonecrosis of femoral head,ONFH)髖關(guān)節(jié)滑膜及PC滑膜中LC3、Beclin1、P62蛋白,以明確其滑膜病變是否與自噬存在相關(guān)性。方法:取ONFH(無明確病因,ARCO Ⅲ期及其以上病變)髖關(guān)節(jié)滑膜與膝關(guān)節(jié)相通的PC滑膜各11例,采用免疫組化檢測其中的LC3、Beclin1、P62蛋白。結(jié)果:ONFH滑膜、PC滑膜中LC3、Beclin-1弱陽性表達(dá),前者表達(dá)量高于后者,但無統(tǒng)計學(xué)差異;p62幾乎均無表達(dá)。結(jié)論:ARCO Ⅲ期及其以上ONFH的髖關(guān)節(jié)滑膜病變與自噬之間不存在相關(guān)性。
[Abstract]:Chapter one the mechanism of autophagy in heterotopic ossification of peripheral joints in ankylosing spondylitis objective: 1. Compared with synovial tissue and cells of popliteal cyst,PC, whether autophagy markers LC3 鈪，

本文編號：2310772