【摘要】：目的探討外源性醛固酮對大鼠原代培養(yǎng)的成骨細胞增殖、堿性磷酸酶活性及成骨相關基因表達的影響及其機制。方法采用酶消化法體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞,CCK-8試劑盒和AKP試劑盒分別檢測成骨細胞的增殖和堿性磷酸酶活性情況,半定量RT-PCR和Western blotting檢測成骨細胞骨形成活性相關標志物和上皮鈉離子通道(α-ENaC)基因的mRNA和蛋白表達。結果與對照組相比,醛固酮濃度為1×10~(-2)~1 μmol/L范圍內可以促進成骨細胞增殖,濃度為1×10~(-3) μmol/L和10 μmol/L時對成骨細胞增殖無顯著影響;但醛固酮在1×10~(-3)~10 μmol/L濃度范圍內對成骨細胞堿性磷酸酶活性均無明顯影響。與對照組相比,醛固酮濃度為1×10~(-2)~1 μmol/L時均能上調成骨細胞中成骨細胞骨形成活性相關標志物I型膠原蛋白(Coll-Ia)、堿性磷酸酶(ALP)、骨橋蛋白(OPN)和α-ENaC基因的mRNA和蛋白的表達水平(P0.05)。結論醛固酮(1×10~(-2)~1 μmol/L)能明顯促進成骨細胞增殖并上調成骨細胞骨形成活性相關標志物的表達,且同時上調ENaC基因的表達,提示ENa C可能是醛固酮調節(jié)成骨細胞功能的作用靶點之一。
[Abstract]:Objective to investigate the effect and mechanism of exogenous aldosterone on proliferation, alkaline phosphatase activity and osteoblast related gene expression in primary cultured rat osteoblasts. Methods the proliferation and alkaline phosphatase activity of osteoblasts were detected by CCK-8 kit and AKP kit by enzyme digestion in vitro. Semi-quantitative RT-PCR and Western blotting were used to detect the expression of mRNA and protein in osteoblast bone formation activity and epithelial sodium channel (偽 -ENAC) gene. Results compared with the control group, the concentration of aldosterone in the range of 1 脳 10 ~ (-2) mol/L could promote the proliferation of osteoblasts, but the concentration of 1 脳 10 ~ (-3) 渭 mol/L and 10 渭 mol/L had no significant effect on the proliferation of osteoblasts. However, aldosterone had no significant effect on alkaline phosphatase activity of osteoblasts in the concentration range of 1 脳 10 ~ (-3) ~ (-3) ~ (10) 渭 mol/L. When aldosterone concentration was 1 脳 10 ~ (-2) or 1 渭 mol/L, the expression levels of type I collagen (Coll-Ia), (ALP), osteopontin (OPN) and 偽 -ENAC gene mRNA and protein in osteoblasts were up-regulated (P0.05). Conclusion Aldosterone (1 脳 10 ~ (-2) ~ (-1) 渭 mol/L) can significantly promote the proliferation of osteoblasts and up-regulate the expression of markers related to osteogenesis activity of osteoblasts, and also up-regulate the expression of ENaC gene, suggesting that ENa C may be one of the targets for aldosterone to regulate the function of osteoblasts.
【作者單位】： 廣東藥科大學生命科學與生物制藥學院;廣東藥科大學生物資源與創(chuàng)新藥物研究中心;
【基金】：國家自然科學基金青年基金項目(81400853) 廣東省普通高校國際暨港澳臺合作創(chuàng)新平臺及國際合作重大項目(項目編號2015KGJHZ022) 中央財政支持地方高校發(fā)展專項資金(粵財政[2016]202號)~~
【分類號】：R580

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本文編號：2167978