【摘要】：目的應(yīng)用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)腹腔注射構(gòu)建大鼠2型糖尿病模型,觀察糖尿病狀態(tài)下大鼠主動(dòng)脈血管組織中高遷移率族蛋白A1(high mobility group A1,HMGA1)m RNA和蛋白的表達(dá)水平,并探討可能影響其變化的病理因素,試圖為糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制及防治研究提供新的方向。方法4周齡雄性SD大鼠按隨機(jī)分組方法分為:正常對(duì)照組(normol contol group,NC)、高糖高脂喂養(yǎng)組(high-sucrose-high-fat diets group,HSFDs)、糖尿病造模組(diabetes mellitus group,DM)。NC組懫用普通標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng),HSFDs組及DM組均懫用高糖高脂飲食喂養(yǎng),起始及喂養(yǎng)4周后分別測(cè)量體重(body weight,BW)并檢測(cè)空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、非空腹血糖(nonfasting blood glucose,NFBG)、血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)及空腹胰島素(fasting insulin,FINS)等相關(guān)生化指標(biāo)的水平。4周末,DM組大鼠腹腔注射STZ(30mg/Kg),3天后開始每周檢測(cè)模型組大鼠NFBG,觀察血糖升高水平。第8周末處死所有大鼠,采集血液標(biāo)本檢測(cè)FPG、NFBG、TC、TG、LDL、HDL、FINS及糖化血紅蛋白(Glycosylated hemoglobin A1c,HBA1c)等生化指標(biāo);留取腹主動(dòng)脈血管組織,HE染色法觀察血管組織形態(tài)學(xué)改變,q RT-PCR、Western Blot及免疫組化法分別檢測(cè)血管中HMGA1 m RNA和蛋白表達(dá)水平。利用Spearman法分別對(duì)FPG、NFBG、TC、TG、LDL、HDL和FINS與HMGA1 m RNA及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果(1)起始時(shí)及喂養(yǎng)4周后,各組大鼠BW、FBG、NFBG、FINS及胰島素敏感指數(shù)(insulin sensitivity index,ISI)等指標(biāo)均無明顯差異(P0.05),起始時(shí)各組大鼠TG、TC、LDL及HDL水平亦無顯著差異(P0.05)。注射STZ后第3、10及21天測(cè)DM組大鼠NFBG均明顯升高(11.1mmol/l)。第8周末,DM組FBG、NFBG、Hb A1c、TG、TC、LDL及HDL水平較NC及HSFD組均明顯增加,而BW、FINS及ISI則明顯下降;HSFDs組的BW、FINS、TC及LDL水平較NC組明顯增加,ISI則明顯下降,以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)熒光定量PCR結(jié)果顯示,DM組大鼠腹主動(dòng)脈HMGA1的m RNA表達(dá)水平明顯高于NC及HSFDs組(P0.05);HSFDs組HMGA1的m RNA表達(dá)水平稍高于NC組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)Western-blot及免疫組化結(jié)果均顯示,DM組大鼠腹主動(dòng)脈HMGA1蛋白表達(dá)水平明顯高于NC及HSFDs組(P0.05);HSFDs組HMGA1蛋白表達(dá)水平稍高于NC組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);此外,免疫組化結(jié)果還顯示,HMGA1蛋白主要定位于血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)核中。(4)HE染色結(jié)果顯示,NC組血管內(nèi)膜平整、光滑,血管平滑肌細(xì)胞排列整齊、緊密;DM組血管內(nèi)膜欠光滑,血管中膜增厚,平滑肌細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)疏松;HSFDs組血管形態(tài)介于前二者之間。對(duì)各組血管內(nèi)-中膜厚度(intimia-media thickness,IMT)進(jìn)行測(cè)量,結(jié)果顯示,HSFDs組血管內(nèi)-中膜厚度較NC組增加,DM組較NC及HSFDs組增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)對(duì)FPG、NFBG、TC、TG、LDL、HDL及FINS與HMGA1 m RNA及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析,結(jié)果顯示FBG、NFBG、TC及LDL水平均與大鼠主動(dòng)脈中HMGA1的表達(dá)水平呈正相關(guān)性(FBG:HMGA1m RNA:r=0.424,P=0.039,HMGA1 protein(IOD):r=0.549,P=0.005;NFBG:HMGA1 m RNA:r=0.584,P=0.003,HMGA1 protein(IOD):r=0.646,P=0.001;TC:HMGA1 m RNA:r=0.544,P=0.006,HMGA1protein(IOD):r=0.726,P=0.000;LDL:HMGA1 m RNA:r=0.636,P=0.001,HMGA1 protein(IOD):r=0.756,P=0.000)。結(jié)論(1)高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射可成功構(gòu)建大鼠2型糖尿病模型。(2)糖尿病大鼠主動(dòng)脈可發(fā)生中膜增厚,平滑肌細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)疏松等形態(tài)改變;主動(dòng)脈組織中HMGA1m RNA及蛋白表達(dá)水平均增加。(3)FBG、NFBG、TC及LDL均與HMGA1表達(dá)水平呈正相關(guān)性,可能是影響動(dòng)脈血管組織中HMGA1表達(dá)變化的病理因素。
[Abstract]:Objective To investigate the expression level of high mobility group A1 ( HMG A1 ) m RNA and protein in aorta vascular tissue of diabetic rats by intraperitoneal injection of high sugar and high fat diet and to explore the pathological factors which might affect the changes of diabetes mellitus . Methods Four week old male SD rats were divided into normal control group ( NC ) , high - sugar - high - fat diets group ( HSFDs ) , diabetes mellitus group ( DM ) . 鎳敤楂樼硸楂樿剛楗鍠傚吇,璧峰鍙?qiáng)鍠傚叄?

本文編號(hào)：2128223