本文選題：人源肝癌HepG細(xì)胞 + 胰島素抵抗　； 參考：《吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年04期

【摘要】：目的:探討人源肝癌HepG2細(xì)胞胰島素抵抗(IR)模型(HepG2/IR)和逆轉(zhuǎn)模型(HepG2/IRPH)中叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子O1(FoxO1)的mRNA和蛋白表達(dá)水平,闡明該基因參與IR的作用機(jī)制。方法:選擇人源肝癌HepG2細(xì)胞,采用終濃度1×10~(-10)、1×10~(-9)、1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)和1×10~(-5) mol·L~(-1)胰島素誘導(dǎo)24、48和72h,對(duì)照組細(xì)胞不加胰島素,用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)上清液中葡萄糖水平,計(jì)算各組細(xì)胞的葡萄糖消耗量,以確定IR模型建立的最佳誘導(dǎo)條件;采用終濃度為0.156、0.313、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000mmol·L~(-1)鹽酸吡咯列酮(PH)誘導(dǎo)HepG2建立逆轉(zhuǎn)抵抗模型,同時(shí)設(shè)立對(duì)照組,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,確定PH的最佳逆轉(zhuǎn)濃度;利用Real-time PCR法和Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞FoxO1mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1×10-7 mol·L~(-1)胰島素作用36h,葡萄糖消耗量減少45.84%,發(fā)生明顯的IR,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照組比較,1.25mmol·L~(-1)PH逆轉(zhuǎn)抵抗24h,細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯變化(P0.05)。人源肝癌HepG2細(xì)胞發(fā)生IR時(shí),與對(duì)照組比較,FoxO1mRNA和蛋白的表達(dá)水平均明顯升高(P0.01);IR模型逆轉(zhuǎn)后,與對(duì)照組比較,FoxO1mRNA和蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:人源肝癌HepG2細(xì)胞IR與FoxO1mRNA的表達(dá)有關(guān)聯(lián)性,FoxO1mRNA表達(dá)水平檢測(cè)有可能作為胰島素增敏劑的藥效評(píng)估指標(biāo),降低FoxO1mRNA表達(dá)水平可作為2型糖尿病治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression of mRNA and protein in HepG2 cell line of human hepatocellular carcinoma (HepG2) model of insulin resistance (IRR) and reverse model HepG2 / IRPH), and to elucidate the mechanism of this gene involved in IR. Methods: human hepatocellular carcinoma (HepG2) cells were induced by insulin for 2448 and 72 hours with 1 脳 10 ~ (-10) -10 ~ (-10) -10 ~ (-10) -10 ~ (-9) mol) and 1 脳 10 ~ (10 ~ (-7) mol / L ~ (-6) and 1 脳 10 ~ (10 ~ (-5) mol / L ~ (-1) for 24 48 h and 72 h, respectively. Glucose level in the supernatant was measured by glucose oxidase method, and the glucose consumption of the cells in each group was calculated. In order to determine the optimal induction conditions of IR model, the reverse resistance model was established by HepG2 induced by final concentration of 0.156 (0.3130.625) 1.250 (2.500,5.000,10.000mmol / L) pyrrolidone hydrochloride (PHH), and the control group was set up to detect the cell proliferation activity and determine the optimal reverse concentration of PH. The expression of FoxO1mRNA and protein was detected by Real-time PCR and Western blotting. Results when treated with 1 脳 10 ~ (-7) mol / L ~ (-1) insulin for 36 h, glucose consumption decreased by 45.84%, and there was a significant difference between control group and control group (P 0.05). Compared with the control group, 1.25mmol L~(-1)PH reversed the resistance for 24 h, but the cell proliferation activity did not change significantly (P 0.05). The expression level of FoxO1 mRNA and protein in HepG2 cells of human hepatocellular carcinoma was significantly higher than that of control group, and the expression level of FoxO1 mRNA and protein was not significantly different from that of control group. Conclusion: there is a correlation between IR and FoxO1mRNA expression in HepG2 cells of human hepatocellular carcinoma. The detection of FoxO1 mRNA expression may be used as an index to evaluate the pharmacodynamics of insulin sensitizer, and the decrease of FoxO1mRNA expression level may be a new target for the treatment of type 2 diabetes mellitus.
【作者單位】： 蘭州大學(xué)第二醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科;蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)資金資助課題(861174) 甘肅省科技廳自然科學(xué)基金青年科研基金資助課題(1308RJYA065) 甘肅省衛(wèi)計(jì)委衛(wèi)生行業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目資助課題(GSWSKY-2015-64)
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1

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本文編號(hào)：1927705