本文選題：糖尿病 + 內(nèi)皮功能障礙��； 參考：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:糖尿病是由于機(jī)體胰島素分泌不足或利用缺陷而導(dǎo)致的慢性疾病,是21世紀(jì)一項(xiàng)重要的公共衛(wèi)生問題,據(jù)世界衛(wèi)生組織及全球糖尿病聯(lián)盟數(shù)據(jù)顯示,2014年全球大約有4.22億成人罹患糖尿病,即全球每11個(gè)成人中就有一個(gè)患上糖尿病,另有3.18億成年人為糖耐量受損狀態(tài),而糖耐量受損是未來罹患糖尿病的高危因素。糖尿病患者人數(shù)以遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過我們的預(yù)期在遞增,據(jù)WHO估計(jì)至2040年,全球有6.42億成年人患有糖尿病,即每10個(gè)成年人中就有一個(gè)患上糖尿病。并且糖尿病是一種致死率與致殘率都相當(dāng)高的疾病,據(jù)統(tǒng)計(jì),糖尿病與心血管疾病、癌癥、慢性呼吸系統(tǒng)疾病一起成為全球四大致死原因。與非糖尿病人群相比,糖尿病患者出現(xiàn)一系列致殘或致命性疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高。在糖尿病患者中往往伴有心血管疾病的出現(xiàn),約41%的2型糖尿病患者并發(fā)心血管疾病。罹患2型糖尿病使患者發(fā)生冠心病及中風(fēng)的概率增加2倍～4倍。并且糖尿病死亡患者的75%～80%因其并發(fā)心肌梗死。因此,業(yè)內(nèi)認(rèn)為"糖尿病是心血管疾病的等危癥"。血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損是糖尿病患者高發(fā)心血管疾病的主要發(fā)病機(jī)制。在高血糖的環(huán)境下,內(nèi)皮依賴性的舒張功能出現(xiàn)障礙,主要表現(xiàn)為高血糖使內(nèi)皮細(xì)胞中的NOX家族(NADPH oxidase)大量產(chǎn)生 ROS(Reactive oxygen species),一方面導(dǎo)致生成的NO與超氧根離子反應(yīng)生成NO3-,使NO的生物活性降低,另一方面NO3-使Enos(endothelial nitric oxide synthase)解耦聯(lián),不再生成NO,反而生產(chǎn)O2-,陷入惡性循環(huán),介導(dǎo)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展。但近年來的研究發(fā)現(xiàn),NOX家族中除了介導(dǎo)高血糖對血管的損傷作用外,NOX4對血管卻有保護(hù)作用,因此可以將NOX4作為糖尿病血管內(nèi)皮功能損傷時(shí)的作用靶點(diǎn),發(fā)揮其保護(hù)作用,減少高血糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用。但是對于NOX4介導(dǎo)血管保護(hù)作用的機(jī)制及機(jī)體對NOX4的調(diào)節(jié)過程也不甚明了。目的:已有研究表明NOX家族中的NOX4對糖尿病的血管內(nèi)皮功能有保護(hù)作用,但對于NOX4的具體作用機(jī)制不甚明了。本實(shí)驗(yàn)旨在探究NOX4在糖尿病的血管保護(hù)作用中的具體機(jī)制以及NOX4轉(zhuǎn)錄過程中的上下游通路。方法:1.利用轉(zhuǎn)錄因子(結(jié)合啟動(dòng)子)微孔板芯片檢測試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)GATA在NOX4的轉(zhuǎn)錄過程中扮演轉(zhuǎn)錄因子的角色,但具體GATA家族中的哪個(gè)亞型才是NOX4的轉(zhuǎn)錄因子并不能用該試劑盒檢測出來,因此我們進(jìn)一步利用GATA1-GATA6過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞及用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)確認(rèn)GATA4是NOX4的轉(zhuǎn)錄因子。2.鏈脲霉素破壞小鼠胰島細(xì)胞,誘發(fā)小鼠糖尿病。本實(shí)驗(yàn)用鏈脲霉素構(gòu)建糖尿病模型。并且利用糖尿病小鼠的胸主動(dòng)脈,GATA4抗體做免疫組化實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證糖尿病小鼠中的GATA4的表達(dá)變化。3.在高糖培養(yǎng)72h的HUVEC,與對照組相比,用WB、Q-PCR檢驗(yàn)GATA4的表達(dá)量是否受高糖環(huán)境的影響。4.在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中轉(zhuǎn)染GATA4過表達(dá)質(zhì)粒,使GATA4過表達(dá),然后利用WB、Q-PCR驗(yàn)證NOX4、總eNOS、P-eNOS的表達(dá),并檢測HUVEC中的NO濃度。結(jié)果:1.利用轉(zhuǎn)錄因子(結(jié)合啟動(dòng)子)微孔板芯片檢測試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)GATA在NOX4的轉(zhuǎn)錄過程中扮演轉(zhuǎn)錄因子的角色,但具體GATA家族中的哪個(gè)亞型才是NOX4的轉(zhuǎn)錄因子并不能用該試劑盒檢測出來,因此我們利用GATA1-GATA6的過表達(dá)質(zhì)粒分別驗(yàn)證了他們對NOX4的表達(dá)作用,發(fā)現(xiàn)GATA4過表達(dá)質(zhì)粒能夠?qū)е翹OX4的mRNA水平上升,從而證明了 GATA4為NOX4的轉(zhuǎn)錄因子,并進(jìn)一步用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)確認(rèn)GATA4是NOX4的轉(zhuǎn)錄因子。2.與對照組相比,在糖尿病小鼠及高糖培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中,GATA4的表達(dá)量下調(diào)。3.在高糖培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中過表達(dá)GATA4,與對照組相比,GATA4過表達(dá)組的NOX4表達(dá)增加,磷酸化eNOS表達(dá)上調(diào),NO濃度增加,在高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能損傷中起保護(hù)作用。結(jié)論:NOX4在高血糖內(nèi)皮功能中起保護(hù)作用。GATA4為NOX4的啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄因子,GATA4啟動(dòng)NOX4的表達(dá),通過上調(diào)peNOS,增加釋放NO,在高血糖內(nèi)皮細(xì)胞中起保護(hù)作用。
[Abstract]:Background : Diabetes mellitus is a major public health problem in the 21st century due to the insufficiency of insulin secretion or the use of defects . In recent years , there are about 420 million adults suffering from diabetes in the world . The expression of GATA4 was regulated by means of WB and Q - PCR . The expression of GATA4 was regulated by WB and Q - PCR .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2

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本文編號：1909598