本文選題：系統(tǒng)性紅斑狼瘡 + 狼瘡腎炎��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種復(fù)雜的自體免疫性疾病,幾乎影響身體各個器官,其中沉積在腎臟的自身抗體及免疫復(fù)合物(immune complexes,IC)能觸發(fā)炎癥反應(yīng),導(dǎo)致狼瘡腎炎(lupus nephritis,LN),可發(fā)展至終末期腎病[1]。LN的發(fā)病機制尚不明確。目前LN的治療主要依靠激素和免疫抑制劑。長期使用激素可引起諸如高血壓、血糖升高、誘發(fā)感染、骨質(zhì)疏松等不良反應(yīng)。而使用免疫抑制劑可出現(xiàn)骨髓抑制、肝腎損害等副作用。因此,探討狼瘡腎炎的發(fā)病機制有助于探尋療效確切、副作用小的治療手段。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是否參與到LN的發(fā)病機制尚未明確,本研究通過觀察MRL/lpr小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激現(xiàn)象、利用4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)抑制ERS,觀察其變化,探討LN的發(fā)病機制,有助于為LN的治療提供新思路。一、材料和方法1.小鼠狼瘡腎炎模型及干預(yù)方案選用12周齡的雌性MRL/lpr小鼠共16只,隨機分為4-PBA干預(yù)組和溶媒對照組,每組8只。同時選取8只12周齡雌性健康小鼠作為正常對照組。4-PBA干預(yù)組小鼠給予1.0 g.kg-1.d-1劑量的4-PBA灌胃。正常對照組和溶媒對照組則分別給予等體積生理鹽水灌胃。治療前及治療過程中第4、8和12周檢測24小時尿蛋白定量;第12周檢測血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)。2.組織學(xué)損傷評估腎組織石蠟切片行HE、PAS染色,觀察腎小球、腎小管及腎血管病理損害情況。3.免疫組織化學(xué)染色及量化腎組織石蠟切片行免疫組化染色觀察腎小球、腎間質(zhì)及腎血管周圍CD3+T細胞浸潤情況。4.RT-PCR檢測mRNA表達提取腎臟組織總RNA,以GAPDH作為內(nèi)參照,檢測GRP78、CHOP、PERK、eIF2α、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6 mRNA 表達,計算目標條帶與內(nèi)參照條帶密度的比值。5.Western blot檢測蛋白表達提取腎臟組織總蛋白,以GAPDH作為內(nèi)參照,檢測GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6 蛋白表達。提取腎臟組織的核蛋白,以Fibrillarin作為內(nèi)參照,檢測核內(nèi)NF-κB p65表達,計算目標條帶與內(nèi)參照條帶密度的比值。6.ELISA提取腎臟組織勻漿的上清液,利用ELISA檢測上清液MCP-1、TNF-α、IL-6水平。7.統(tǒng)計學(xué)分析組間均數(shù)的比較使用方差分析(ANOVA),兩兩比較采用LSD-t檢驗,p0.05證明存在統(tǒng)計學(xué)差異。二、結(jié)果1.MRL/lpr小鼠LN中的ERS現(xiàn)象與正常小鼠相比,MRL/lpr小鼠腎臟中ERS相關(guān)標志物GRP78 mRNA及GRP78蛋白的表達明顯升高(p0.05),且ERS信號通路PERK和IRE1α的磷酸化蛋白表達也明顯升高(p0.05)。2.MRL/lpr小鼠蛋白尿變化情況MRL/lpr小鼠在12周齡開始出現(xiàn)蛋白尿,與正常對照組小鼠比較,溶媒對照組小鼠的24小時尿蛋白定量明顯增多(p0.05);在4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組小鼠的24小時尿蛋白排泄量顯著低于溶媒對照組(p0.05)。3.MRL/lpr小鼠血生化變化情況與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠的血BUN和SCr均顯著升高(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組小鼠的血BUN及SCr顯著低于溶媒對照組(p0.05)。4.MRL/lpr小鼠腎臟組織學(xué)變化情況與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠腎小球、腎小管間質(zhì)及腎血管評分均明顯增加(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組小鼠的腎臟組織評分顯著低于溶媒對照組(p0.05)。5.MRL/lpr小鼠腎臟炎癥細胞浸潤情況與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠的腎組織CD3+T淋巴細胞浸潤明顯增多(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組CD3+T淋巴細胞浸潤程度較溶媒對照組顯著減輕(p0.05)。6.MRL/lpr 小鼠腎臟 GRP78、CHOP、PERK、eIF2α、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6mRNA 表達情況RT-PCR結(jié)果顯示,與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠的GRP78、CHOP、PERK、eIF2α、ATF4、IRE1α、XBP1、ATF6mRNA 表達水平均顯著升高(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組以上指標較溶媒對照組顯著降低(p0.05)。7.MRL/lpr 小鼠腎臟 GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6蛋白表達情況Western blot結(jié)果顯示,與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠的GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6 蛋白表達水平均顯著升高(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組以上指標較溶媒對照組顯著降低(p0.05)。8.MRL/lpr小鼠腎臟MCP-1、TNF-α、IL-6蛋白表達情況ELISA結(jié)果顯示,與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠的腎組織勻漿MCP-1、TNF-α、IL-6含量均顯著升高(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組以上指標較溶媒對照組顯著降低(p0.05)。9.MRL/lpr小鼠腎臟NF-κB活化情況Western blot結(jié)果顯示,與正常對照組比較,溶媒對照組小鼠腎臟核蛋白表達量均顯著升高(p0.05);4-PBA干預(yù)12周后,4-PBA干預(yù)組腎臟核蛋白表達量較溶媒對照組顯著降低(p0.05)。三、小結(jié)本研究發(fā)現(xiàn)在MRL/lpr小鼠中存在ERS,使用ERS抑制劑4-PBA進行干預(yù):1.減少MRL/lpr小鼠尿蛋白的排泄,改善腎功能;2.減輕腎臟病理損害;3.抑制腎臟炎癥細胞浸潤;4.抑制腎臟NF-κB活化;5.減少促炎癥細胞因子MCP-1、TNF-α、IL-6的表達;6.抑制ERS狀態(tài)。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)在小鼠LN中:1.ERS參與小鼠LN的發(fā)病;2.ERS參與小鼠LN的發(fā)病機制可能與NF-1κB炎癥信號通路活化有關(guān);3.抑制ERS可減輕腎臟炎癥反應(yīng)及腎臟損害。
[Abstract]:Systemic lupus erythematosus ( SLE ) is a complex autoimmune disease that affects almost all organs of the body , in which the autoantibodies and immune complexes ( IC ) deposited on the kidney trigger inflammatory responses , which lead to lupus nephritis ( LN ) , which can be developed to end - stage renal disease . In order to explore the pathogenesis of lupus nephritis , we observed the expression of GRP78 , CHOP , PERK , eIF2偽 , ATF4 , IRE1偽 , XBP1 and ATF6 . Results Compared with the control group , the levels of serum BUN and SCr were significantly lower than those in the control group ( P < 0.05 ) . Compared with the control group , the expressions of MCP - 1 , TNF - 偽 and IL - 6 in renal tissue of mice were significantly lower than those in the control group ( P < 0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R593.242

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本文編號：1905576