本文選題：強直性脊柱炎 + microRNA��； 參考：《寧夏醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：目的通過對AS患者PBMC中5種微小RNA(micro-RNA,mi RNAs)表達量的檢測,篩選出差異性表達的mi RNAs。探討mi RNAs是否可以作為AS患者潛在的診斷標志物,并對mi R-495在DVL-2蛋白表達中的調(diào)控作用進行研究。方法1.利用mi Randa、Star Base等生物信息學軟件,篩選與AS致病密切相關的mi RNAs。并利用Real-time PCR方法對臨床61例AS患者和31例健康者PBMC中mi R-17、mi R-106、mi R-181、mi R-495和mi R-30的表達情況進行檢測,同時利用統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進行分析,篩選可以作為AS診斷潛在生物標志物的mi RNAs。2.利用mi Randa、Star Base等生物信息學軟件,以AS患者PBMC中表達量具有顯著性差異的mi R-495為研究對象,對其潛在的靶基因進行預測。通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)及Western-Blot實驗驗證mi R-495與DVL-2的靶向關系。3.應用ELISA對28例AS患者和14例健康者血漿中的DVL-2蛋白量進行檢測,研究AS患者PBMC中mi R-495的表達量與血漿中DVL-2蛋白水平的相關性以及mi R-495通過靶向抑制DVL-2蛋白調(diào)控AS發(fā)病機制。結(jié)果1.在AS患者PBMC中表達上調(diào)的有mi R-106與mi R-30;表達下調(diào)mi R-181(p0.05)、mi R-495(p0.05)和mi R-17。并分別對mi R-181和mi R-495作為臨床診斷進行ROC曲線分析,其中mi R-181的AUG為0.697,敏感性達76.67%,特異性達54.84%,正確性為68.48%。通過對結(jié)果的分析,我們認為mi R-181對臨床診斷參考價值較低;而mi R-495的AUG為0.729,敏感性達92.23%,特異性達58.06%,正確性為86.9%。結(jié)果表明,mi R-495有望成為AS疾病潛在的診斷標志物。2.預測結(jié)果表明mi R-495可以靶向作用于DVL-2基因。雙熒光素酶報告結(jié)果表明:過表達mi R-495可抑制DVL-2的相對熒光素酶活性;相反抑制mi R-495可增加DVL-2的相對熒光活性。Western-Blot結(jié)果表明:過表達mi R-495可抑制DVL-2蛋白表達量;而抑制表達mi R-495可促進DVL-2蛋白的表達。由此我們認為mi R-495可以靶向抑制DVL-2。3.進一步通過ELISA方法檢測臨床樣本血漿中DVL-2的表達情況,在AS患者中DVL-2的表達量明顯增高。并聯(lián)合PBMC中mi R-495的表達量與血漿中DVL-2蛋白的表達量進行相關性分析,結(jié)果表明mi R-495與DVL-2呈負相關,進一步說明mi R-495可靶向抑制DVL蛋白的表達并參與AS發(fā)病機制的調(diào)控。結(jié)論1.PBMC中mi R-495的表達水平,對AS疾病的臨床診斷具有參考意義,有望成為AS疾病潛在的診斷標志物。2.mi R-495可以靶向調(diào)節(jié)Wnt通路中的關鍵蛋白DVL-2的表達,在AS疾病中起到調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:Objective to detect the expression of micro-RNAi RNAs-5 kinds of micro-RNAs in PBMC of patients with as, and to screen out the differentially expressed miRNAs. To explore whether mi RNAs can be used as a potential diagnostic marker in as patients, and to study the regulatory role of mi R-495 in the expression of DVL-2 protein. Method 1. Using the bioinformatics software such as mi Randa Star Base to screen the mi RNAs which are closely related to the pathogenicity of as. The expressions of mi R-17P mi R-106mi R-181mmi R-495 and miR-30 in 61 patients with as and 31 healthy controls were detected by Real-time PCR method. The results of the experiment were analyzed by statistical software. To screen the potential biomarker for as diagnosis, mi RNas. 2. 2. Using the bioinformatics software such as mi Randaanstar Base, the potential target genes of as patients with PBMC were predicted by using mi R-495, which had significant difference in PBMC expression. The targeting relationship between mi R-495 and DVL-2 was confirmed by double luciferase reporter gene system and Western-Blot experiment. The levels of DVL-2 protein in plasma of 28 patients with as and 14 healthy controls were detected by ELISA. The correlation between the expression of mi R-495 in PBMC and the level of DVL-2 protein in plasma was studied. The mechanism of regulation of as by targeting inhibition of DVL-2 protein was studied. Result 1. The up-regulated expression of mi R-106 and mi R-30 was found in PBMC of as patients, and the down-regulation of the expression of mi R-181 p0.05 + mi R-495P 0.05) and mi R-17. The ROC curves of miR-181 and miR-495 were analyzed respectively. The AUG of miR-181 was 0.697, the sensitivity was 76.677.The specificity was 54.844.The accuracy was 68.48. Through the analysis of the results, we think that the reference value of miR-181 for clinical diagnosis is lower, while the AUG of miR-495 is 0.729, the sensitivity is 92.233.The specificity is 58.06, and the correctness is 86.9. The results showed that MMI R-495 might be a potential diagnostic marker for as. The predicted results showed that mi R-495 could target DVL-2 gene. The results of double luciferase report showed that overexpression of mi R-495 could inhibit the relative luciferase activity of DVL-2, whereas inhibition of mi R-495 could increase the relative fluorescence activity of DVL-2. Western-Blot results showed that overexpression of mi R-495 could inhibit the expression of DVL-2 protein. Inhibition of the expression of mi R-495 could promote the expression of DVL-2 protein. Therefore, we think that mi R-495 can be targeted to inhibit DVL 2.3. Furthermore, the expression of DVL-2 in plasma was detected by ELISA method, and the expression of DVL-2 was significantly increased in as patients. The correlation between the expression of miR-495 in PBMC and the expression of DVL-2 protein in plasma was analyzed. The results showed that the expression of miR-495 was negatively correlated with DVL-2, which further indicated that miR-495 could inhibit the expression of DVL protein and participate in the regulation of the pathogenesis of as. Conclusion the expression level of miR-495 in 1.PBMC may be useful for the clinical diagnosis of as, and it may be a potential marker for the diagnosis of as. MiR-495 can regulate the expression of DVL-2, a key protein in Wnt pathway, and play a regulatory role in as disease.
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R593.23

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本文編號：1831678