一種從外周血單個核細(xì)胞中祛除低密度粒細(xì)胞并純化T淋巴細(xì)胞的簡易方法(英文)
本文選題:低密度粒細(xì)胞 + 中性粒細(xì)胞胞外網(wǎng)狀陷阱; 參考:《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》2017年07期
【摘要】:目的:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)中的低密度粒細(xì)胞(LDGs)可以自發(fā)而過度地形成中性粒細(xì)胞胞外網(wǎng)狀陷阱(NETs),而形成的NETs會降低T細(xì)胞激活的閾值。采用PBMCs做淋巴細(xì)胞研究時,所含的異常增多的LDGs可能會顯著影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此需要了解其他自身免疫病中LDGs的比例,并需要一種簡便地祛除PBMCs中LDGs的方法。創(chuàng)新點(diǎn):首次提出LDGs清除的方法,驗(yàn)證了離心后貼壁法清除LDGs的有效性和可靠性。方法:采用流式細(xì)胞儀測定55例皮肌炎(DM)患者、15例多發(fā)性肌炎(PM)患者、42例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者、25例SLE患者(陽性對照)和19例健康對照(陰性對照)PBMCs中LDGs的比例。采用提高離心力、離心后貼壁和全血沉淀后再離心這三種方法祛除PBMCs中的LDGs,進(jìn)一步比較各種方法的LDGs清除率和對PBMCs中T細(xì)胞的影響程度。清除T-SPOT.TB陽性患者PBMCs中LDGs后復(fù)測T-SPOT.TB,明確LDGs是否對T-SPOT.TB結(jié)果有影響。結(jié)論:本研究中DM、PM、RA和SLE患者PBMCs中LDGs比例普遍升高(圖1)。清除PBMCs中LDGs后,T-SPOT.TB顯著降低(圖2)。離心后貼壁法不但能最有效地清除LDGs,且對PBMCs中T細(xì)胞的比例影響最小(圖3~5)。綜上所述,PBMCs中LDGs的比例在DM、PM、RA和SLE患者中普遍增高;采用PBMCs做T細(xì)胞相關(guān)研究時LDGs通過形成NETs對T細(xì)胞激活的影響不能忽視;離心后貼壁法可以簡單而高效地清除PBMCs中的LDGs。
[Abstract]:Aim: low density granulocyte (LDGs) in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from patients with systemic lupus erythematosus (SLE) can spontaneously and excessively form neutrophil net traps, and the resulting NETs can decrease the threshold of T cell activation. When PBMCs is used for lymphocyte study, the abnormal increase of LDGs may significantly affect the results of the experiment. Therefore, we need to understand the proportion of LDGs in other autoimmune diseases, and a simple method to remove LDGs from PBMCs. Innovation: the method of LDGs removal is put forward for the first time, which verifies the effectiveness and reliability of centrifugal adherent method for LDGs removal. Methods: flow cytometry was used to determine the proportion of LDGs in 55 patients with dermatomyositis, 15 patients with polymyositis and 42 patients with rheumatoid arthritis (RA) and 25 patients with SLE (positive control) and 19 healthy controls (negative control). The LDGs in PBMCs were removed by three methods: increasing centrifugal force, sticking to the wall after centrifugation and centrifugation after whole blood precipitation. The LDGs clearance rate and the degree of influence on T cells in PBMCs were compared. After removing LDGs from PBMCs of T-SPOT.TB positive patients, T-SPO T. TB was measured again to determine whether LDGs had an effect on the results of T-SPOT.TB. Conclusion: in this study, the proportion of LDGs in PBMCs was significantly increased in patients with SLE and RA (Fig. 1). T-SPOT.TB was significantly decreased after LDGs removal in PBMCs (Fig. 2). After centrifugation, adherent method not only effectively scavenged LDGs, but also had the least effect on the proportion of T cells in PBMCs (Fig. 3). In conclusion, the proportion of LDGs in PBMCs was generally increased in patients with RA and SLE, the effect of LDGs on the activation of T cells by forming NETs could not be ignored when PBMCs was used for T cell related studies, and the adherent method after centrifugation could easily and efficiently remove LDGs from PBMCs.
【作者單位】: Department
【基金】:Project supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.81560267 and 81401363) the Natural Science Foundation of Gansu Province(No.1606RJZA213) the Asia Pacific League of Associations for Rheumatology(APLAR) Research Grant 2015
【分類號】:R593.241
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,本文編號:1788523
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