本文選題：糖尿病 + 骨質疏松　； 參考：《南京醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：[背景]:在糖尿病患者中,骨質疏松癥的發(fā)生率明顯高于同齡同性別無糖尿病患者,且此類骨質疏松癥患者可明顯增加骨折不愈合或者延遲的風險。在這些患者中,常常是因為骨的形成減少而導致骨量丟失和骨折愈合減緩;有研究表明甲狀旁腺素相關蛋白(PTHrP)可通過解除高糖對成骨細胞的抑制而促進糖尿病病體的骨形成;但關于這方面的潛在機制目前尚不清楚。[目的]:在體外探討高糖和(或)PTHrp對成骨細胞功能及細胞內經典Wnt信號通路相關組件蛋白的影響。[方法]:取出生2-3天內的PTHrP野生型(WT)和PTHrp雜合子(PTHrp+/-)小鼠的顱骨成骨細胞作為實驗對象,用含5mM葡萄糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)兩種基因型細胞,待第二代長至70%后分別采用含5mM葡萄糖(正常濃度)和25mM葡萄糖(高糖濃度)的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)成骨細胞;同時此基礎上予經典Wnt信號通路抑制劑XAV939和不同濃度的外源性PTHrp干預成骨細胞。用CCK-8檢測各組成骨細胞的增殖、茜素紅染色法檢測成骨細胞體外礦化、免疫熒光檢測成骨細胞內β-catenin的降解程度;用RT-PCR、Western blot方法分析經典Wnt信號通路相關基因和蛋白表達水平。[結果]:相對于正常糖濃度WT組,高糖及高糖+PTHrp+XAV939(2μmol/L)組WT成骨細胞內的β-catenin、Lef-1、ALP、OPG、Runx2等基因或蛋白的相對表達水平均出現(xiàn)下調(p0.05);而高糖+PTHrp處理組的相關基因蛋白表達水平則明顯上調,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與正常糖濃度WT組相比,高糖濃度WT組成骨細胞的增殖、鈣化結節(jié)數(shù)目都明顯減少(P0.05);此外內源性的PTHrp不足,成骨細胞的增殖及礦化能力將進一步受阻(P0.05)。與正常糖濃度WT組相比,培養(yǎng)在高糖濃度中兩種基因型成骨細胞組內Wnt信號通路中的p-GSK3β、β-catenin、Lef-1因子以及RunX2、OPG等下游細胞因子明顯下調(p0.05)。[結論]:以上結果數(shù)據(jù)說明高糖可通過抑制成骨細胞內經典Wnt信號通路,導致成骨細胞內經典Wnt信號通路受阻而影響細胞正常功能。外源性的PTHrp具有抵消高糖對成骨正常功能的抑制作用;而內源性的PTHrp分泌不足可導致經典Wnt信號通路受阻情況進一步惡化。這為運用PTHrp治療糖尿病性骨質疏松癥或糖尿病性骨質疏松繼發(fā)骨折提供了新理論基礎。
[Abstract]:Background: the incidence of osteoporosis in diabetic patients is significantly higher than that in nondiabetic patients of the same age, and the risk of nonunion or delay in this type of osteoporosis is significantly increased.In these patients, bone mass loss and fracture healing are often slowed down by reduced bone formation; PTHrPs have been shown to promote bone formation in diabetic bodies by removing the inhibition of high glucose on osteoblasts;But the potential mechanism for this is unclear.Objective: to investigate the effects of high glucose and / or PTHrp on the function of osteoblasts and the component proteins associated with classical Wnt signaling pathway in vitro.[methods] the osteoblasts of PTHrP wild-type WTand PTHrp heterozygotes (PTHrp / -) mice were taken as experimental objects. The two genotypes were cultured in DMEM medium containing 5mM glucose.After the second generation reached 70%, osteoblasts were cultured on DMEM medium containing 5mM glucose (normal concentration) and 25mM glucose (high glucose concentration).At the same time, XAV939, a classical Wnt signal pathway inhibitor, and exogenous PTHrp of different concentrations were used to interfere with osteoblasts.The proliferation of osteoblasts in each group was detected by CCK-8, mineralization of osteoblasts in vitro was detected by alizarin red staining, the degradation of 尾 -catenin in osteoblasts was detected by immunofluorescence, and the expression levels of genes and proteins related to classical Wnt signaling pathway were analyzed by RT-PCR- Western blot.[results]: the relative expression levels of 尾 -cateninine PTHrp XAV939(2 Runx2 and other genes or proteins in WT osteoblasts were down-regulated in high glucose and high glucose PTHrp XAV939(2 渭 mol / L groups compared with normal glucose concentration WT group, while the relative expression level of related gene proteins in high glucose PTHrp treatment group was significantly up-regulated.The difference was statistically significant (P 0.05).Compared with normal glucose concentration WT group, the proliferation of osteoblasts and the number of calcified nodules in high glucose concentration WT group decreased significantly (P 0.05), in addition, the endogenous PTHrp deficiency further hindered the proliferation and mineralization ability of osteoblasts.Compared with normal glucose concentration WT group, p-GSK3 尾, 尾 -catenin Lef-1 factor and RunX2OPG down-regulated p0.05 in the Wnt signaling pathway of two genotypic osteoblasts cultured in high glucose concentration.[conclusion] the above results suggest that high glucose may affect the normal function of osteoblasts by inhibiting the classical Wnt signaling pathway in osteoblasts and resulting in the blockage of classical Wnt signaling pathway in osteoblasts.Exogenous PTHrp can counteract the inhibitory effect of high glucose on the normal function of osteogenesis, while the lack of endogenous PTHrp secretion can further worsen the obstruction of classical Wnt signaling pathway.This provides a new theoretical basis for the application of PTHrp in the treatment of diabetic osteoporosis or secondary fractures of diabetic osteoporosis.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R580;R587.1

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本文編號：1760132