發(fā)布時(shí)間：2018-04-12 14:40

  本文選題：血管生成素 + 慢病毒載體�。� 參考：《華北理工大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的通過(guò)鏈脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病大鼠模型,并構(gòu)建ANG-shRNA慢病毒載體,干擾糖尿病大鼠視網(wǎng)膜ANG mRNA的表達(dá),揭示ANG在糖尿病眼底病變過(guò)程中的作用。方法構(gòu)建ANG-shRNA慢病毒載體,作用于大鼠肝癌細(xì)胞(RH-35)及糖尿病大鼠視網(wǎng)膜,篩選干擾效率最高的shRNA序列,干擾糖尿病大鼠視網(wǎng)膜ANG mRNA的表達(dá)。采用Evans藍(lán)活體灌注視網(wǎng)膜鋪片,PAS染色法及電鏡觀察糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管和視網(wǎng)膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q PCR)和Western blot檢測(cè)ANG、VEGF和相關(guān)因子Bcl-2、Bax、Hsp27相對(duì)表達(dá)量的變化。結(jié)果1通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的綜合篩選出ANG-shRNA-2為干擾效率最高的序列。2利用STZ成功建立了1型糖尿病大鼠模型,成模率為92.9%。3通過(guò)Evans藍(lán)活體灌注視網(wǎng)膜鋪片觀察到干擾組大鼠,血管走形趨于正常,滲漏和滲出斑的現(xiàn)象有所減輕。4 PAS染色發(fā)現(xiàn),干擾組大鼠內(nèi)界膜光滑平整,各層細(xì)胞數(shù)量明顯增加。5電鏡觀察干擾組血管管腔較規(guī)則完整,視桿細(xì)胞細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻,線粒體腫脹空泡變性的情況減輕,膜盤(pán)形態(tài)趨于正常,排列整齊。6 q PCR和Western blot檢測(cè)各組ANG、VEGF、Bcl-2、Bax及Hsp27相對(duì)表達(dá)情況發(fā)現(xiàn),干擾組ANG、VEGF和Bax的相對(duì)表達(dá)量明顯低于NC組,且隨著病程的延長(zhǎng),除空白對(duì)照組外,其它各組ANG、VEGF和Bax表達(dá)量逐漸增加,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Bcl-2在干擾組的表達(dá)量高于NC組,Hsp27的表達(dá)量在模型對(duì)照組、NC組和干擾組的表達(dá)量均增加,除空白對(duì)照組外,其他各組Bcl-2和Hsp27的相對(duì)表達(dá)量隨著病程的延長(zhǎng),逐漸增加,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論通過(guò)構(gòu)建ANG-shRNA慢病毒載體,作用于1型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜,降低視網(wǎng)膜中ANG mRNA的表達(dá),對(duì)糖尿病視眼底病變具有一定的抑制作用。
[Abstract]:Objective to establish a rat model of type 1 diabetes mellitus by streptozotocin (STZ) and construct ANG-shRNA lentivirus vector to interfere the expression of ANG mRNA in retina of diabetic rats and reveal the role of ANG in the process of diabetic fundus disease.Methods ANG-shRNA lentivirus vector was constructed to act on rat hepatoma cell line RH-35) and the retina of diabetic rats. The shRNA sequence with the highest interference efficiency was screened and the expression of ANG mRNA in the retina of diabetic rats was interfered with.The ultrastructural changes of retinal blood vessels and retinal cells in diabetic rats were observed by Evans blue perfusion in vivo with pas staining and electron microscope, and the relative expression of Evans and Bcl-2Bax-Hsp27 were detected by real-time fluorescence quantitative PCR(q and Western blot.The relative expression of VEGF and Bax in the interference group was significantly lower than that in the NC group, and with the prolongation of the course of disease, the expression of VEGF and Bax in the other groups increased gradually except the blank control group.It increased gradually, and the difference was statistically significant (P 0.05).Conclusion ANG-shRNA lentivirus vector can inhibit the expression of ANG mRNA in retina of type 1 diabetic rats.
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R771.3;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1740175