本文選題：中暑　切入點：熱打擊　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和目的中暑是指長時間在高溫和熱輻射作用下,機體體溫調(diào)節(jié)障礙,核心體溫40℃,引起水、電解質(zhì)代謝紊亂及神經(jīng)系統(tǒng)功能損害的總稱,嚴重時發(fā)展為重癥中暑而誘發(fā)多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。在重癥中暑導致的MODS過程中胃腸道常是最先受影響的器官,并以獨特的生理環(huán)境參與MODS的整個過程;重癥中暑可引起腸道細胞出現(xiàn)大量凋亡,因而深入其具體機制,對探索圍繞腸道保護而建立重癥中暑診治的新策略具有重要的意義。主要方法和結(jié)果1.中暑熱打擊導致腸道組織和腸上皮細胞氧化應(yīng)激損傷SW480細胞先在43℃熱打擊2 h,之后在37℃繼續(xù)培養(yǎng)至不同復溫時間點(0,1,3,6,12 or 24 h)發(fā)現(xiàn),熱打擊后細胞內(nèi)ROS明顯增高,且在復溫6 h表達最高;動物實驗顯示,中暑小鼠腸道組織中ROS明顯增高。2.中暑熱打擊激活腸道和腸上皮細胞中溶酶體,引起線粒體損傷,激活線粒體凋亡通路透射電鏡觀察中暑熱打擊后小鼠腸道組織和SW480細胞線粒體,均明顯腫脹,呈空泡狀,膜結(jié)構(gòu)不清晰;溶酶體被激活,可見大量次級溶酶體;并且,熱打擊后SW480細胞溶酶體膜通透性增加,CathepsinB釋放至胞質(zhì),(?)Ψm下降,Bax/Bcl-2蛋白比值上調(diào),CytochromeC從線粒體釋放至胞質(zhì),Caspase-9和Caspase-3 活化。3.CathepsinB參與熱打擊誘導的腸上皮細胞凋亡通路的激活使用Cathepsin B-SiRNA干擾Cathepsin B的表達后顯著下調(diào)Bax/Bcl-2蛋白比值,抑制Cytochrome C從線粒體釋放至胞質(zhì)以及Caspase-9和Caspase-3的活化。4.ROS作為最上游信號參與中暑熱打擊溶酶體-線粒體損傷介導的腸道細胞凋亡使用ROS清除劑N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)預處理中暑小鼠和SW480細胞,發(fā)現(xiàn)抑制ROS的表達后可以明顯減輕溶酶體損傷,抑制Cathepsin B的釋放。為明確中暑熱打擊后腸道組織和腸上皮細胞中ROS、溶酶體、線粒體以及凋亡之間的關(guān)系,使用ROS清除劑N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)或Cathepsin B特異性抑制劑CA-074 Me預處理動物或細胞,發(fā)現(xiàn)清除ROS或抑制Cathepsin B表達后均可以顯著下調(diào)Bax/Bcl-2蛋白比值的,抑制Cytochrome C從線粒體釋放至胞質(zhì)以及Caspase-9和Caspase-3的活化。結(jié)論熱打擊首先誘導了腸道組織及腸上皮細胞中ROS爆發(fā)性增高,引起了腸道氧化應(yīng)激損傷;進一步導致溶酶體膜通透性增加,CathepsinB從溶酶體釋放至胞質(zhì);釋放至胞質(zhì)中的CathepsinB誘導線粒體損傷,膜電位下降,激活線粒體凋亡通路,包括:上調(diào)Bax/Bcl-2蛋白比值,誘導Cytochrome C從線粒體釋放至胞漿以及caspase-9和caspase-3活化;而ROS始終作為最上游信號參與整個過程的發(fā)生發(fā)展。因而,熱打擊誘導ROS作為最上游信號參與溶酶體-線粒體損傷介導的腸道細胞凋亡,可能是中暑過程中腸道損傷的病理機制之一,并且為中暑從腸道角度出發(fā)防治MODS提供了實驗室依據(jù)。
[Abstract]:Background and objective Heat-stroke is a general term for the disturbance of body's temperature regulation and core body temperature of 40 鈩，

本文編號：1721261