本文選題：整合素連接激酶　切入點(diǎn)：糖尿病　出處：《暨南大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景隨著社會(huì)人口老齡化,糖尿病發(fā)病率逐漸上升,伴隨的糖尿病并發(fā)癥如糖尿病皮膚潰瘍、糖尿足的發(fā)病人數(shù)亦相應(yīng)地逐漸增加。臨床上治療糖尿病皮膚潰瘍或糖尿病足面臨著許多困難,因其形成因素復(fù)雜,包括糖尿病血管病變致皮膚血運(yùn)不良、神經(jīng)感覺功能降低、創(chuàng)面微環(huán)境的改變致創(chuàng)面易感染、涉及創(chuàng)面愈合的各種細(xì)胞和細(xì)胞因子功能減弱等等。因此,研究糖尿病皮膚病變及其創(chuàng)面難愈的確切機(jī)制已成為學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。整合素連接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是整合素信號(hào)通路的關(guān)鍵激酶,在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖、凋亡、存活、分化、遷移、侵襲和血管生成等方面起著重要作用。目前國內(nèi)外的研究已證明ILK不僅在維持皮膚的正常結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)育上具有不可缺少的作用,還可通過ILK/AKT/GSK3β傳導(dǎo)途徑提高成纖維細(xì)胞的增殖和抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞的分化來增強(qiáng)創(chuàng)面的收縮,調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞和毛囊表皮干細(xì)胞的增殖、遷移和存活來加速創(chuàng)面的上皮化,從而發(fā)揮促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。目前,有關(guān)ILK與糖尿病的相關(guān)性研究主要集中在糖尿病腎病和糖尿病視網(wǎng)膜病變中,而其在糖尿病皮膚病變和創(chuàng)面愈合中的表達(dá)及作用則尚未見報(bào)道。故本研究通過建立糖尿病大鼠創(chuàng)面模型,觀察ILK及其下游信號(hào)AKT/GSK 3β的表達(dá),以探討整合素信號(hào)通路在糖尿病皮膚病變及創(chuàng)面愈合中的作用。第一部分糖尿病動(dòng)物創(chuàng)面模型的制備目的 制備穩(wěn)定可靠的糖尿病大鼠創(chuàng)面模型。方法 36只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,過夜禁食12h以上,自由飲水。次日糖尿病組大鼠按60mg/kg的劑量一次性腹腔注射濃度為1%的STZ溶液,正常組大鼠注射等量的檸檬酸緩沖液。72h后檢測(cè)隨機(jī)血糖,以血糖16.7mmol/L為確定糖尿病的標(biāo)準(zhǔn)。2周后在其背部切除2cm×2cm大小的全層皮膚建立創(chuàng)面模型。結(jié)果 糖尿病組大鼠注射STZ后,出現(xiàn)明顯“三多一少”的癥狀,飲水、食量和尿量增多,體重逐漸下降,伴有毛發(fā)稀疏、光澤變暗等,血糖水平升高至28.91±9.33mmol/L;正常組大鼠血糖穩(wěn)定在6.538±0.62mmol/L,體重逐漸增加。建立大鼠創(chuàng)面模型后,糖尿病大鼠在實(shí)驗(yàn)過程中均順利完成觀察和取材,未出現(xiàn)中途死亡。糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合緩慢,愈合時(shí)間為30.35±2.51天,明顯大于正常大鼠的21.47±1.94天。結(jié)論 采用腹腔一次注射60mg/kg STZ建立糖尿病大鼠創(chuàng)面模型具有成功率高、穩(wěn)定性高和死亡率低等優(yōu)點(diǎn)。第二部分ILK及其下游信號(hào)在糖尿病大鼠皮膚組織中的表達(dá)目的 通過觀察糖尿病大鼠皮膚中ILK及其下游信號(hào)的表達(dá),以探討ILK及其下游信號(hào)在糖尿病皮膚病變的作用。方法 實(shí)驗(yàn)分為正常大鼠組(N組,18只)和糖尿病大鼠組(DM組,18只)。PCR檢測(cè)兩組大鼠皮膚組織ILK、AKT和GSK-3βm RNA的表達(dá),Western Blot檢測(cè)ILK、AKT、p-AKT、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白的表達(dá),HE染色切片觀察皮膚改變。結(jié)果 隨著時(shí)間的延長,糖尿病大鼠的全層皮膚和表皮厚度逐漸下降。PCR結(jié)果顯示糖尿病大鼠皮膚中ILK和AKT m RNA表達(dá)顯著低于正常大鼠(t值分別為4.779和3.4403,P0.05),而兩組大鼠GSK-3βm RNA表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.363,P0.05)。Western blot結(jié)果顯示糖尿病大鼠皮膚中ILK、AKT和p-AKT蛋白的表達(dá)均顯著低于正常大鼠(t值分別為2.947,6.209和2.63,P0.05);兩組大鼠皮膚的GSK-3β蛋白的表達(dá)水平無顯著差異(t=0.652,P0.05),而糖尿病大鼠的p-GSK-3β蛋白表達(dá)顯著高于正常大鼠(t=4.131,P0.05)。結(jié)論 糖尿病皮膚病變可能與整合素連接激酶及其下游信號(hào)的表達(dá)變化(ILK/AKT/p-AKT的表達(dá)下降)有關(guān)。第三部分ILK/p AKT在糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合過程中的表達(dá)目的 通過觀察糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合過程中ILK/p AKT的表達(dá),以ILK/p AKT信號(hào)通路在糖尿病創(chuàng)面愈合中的作用。方法 實(shí)驗(yàn)分為正常大鼠組(N組,18只)18只和糖尿病大鼠組(DM組,18只)。糖尿病大鼠模型成功建立后第2周,于背部切除兩個(gè)約2cm×2cm大小的全層皮膚缺損創(chuàng)面。在兩組大鼠創(chuàng)面愈合過程的第3、7、10、14和21天切取創(chuàng)面組織,Western blot檢測(cè)創(chuàng)面組織中ILK/p-AKT的表達(dá)。創(chuàng)面愈合過程中定期拍照以計(jì)算創(chuàng)面愈合速率。結(jié)果 在創(chuàng)面愈合過程中,糖尿病大鼠的創(chuàng)面愈合明顯慢于正常大鼠,表現(xiàn)為創(chuàng)面收縮減弱和上皮化緩慢;正常大鼠創(chuàng)面組織的ILK表達(dá)逐漸升高,而糖尿病大鼠的ILK表達(dá)呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì),但兩組大鼠的創(chuàng)面組織與皮膚組織以及各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面組織之間的ILK表達(dá)并沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組大鼠創(chuàng)面組織中p-AKT的表達(dá)較正常皮膚明顯升高(除外糖尿病大鼠第14天,兩組其余時(shí)間點(diǎn)的t=4.450~22.566,P0.01),呈現(xiàn)先增加而后減少的趨勢(shì),且正常大鼠各時(shí)間點(diǎn)的創(chuàng)面組織p-AKT的表達(dá)水平高于糖尿病大鼠(除外第3天,其余時(shí)間點(diǎn)t=4.091~20.555,P0.01或P0.05)。結(jié)論 糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合緩慢可能與其創(chuàng)面組織中p-AKT的表達(dá)下降有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張玉領(lǐng);孫長顥;;2型糖尿病動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];實(shí)用糖尿病雜志;2011年04期

2 梁振文;李葉揚(yáng);林偉華;李罡;孫敬恩;王仁坤;王曉紅;;QLT0267抑制整合素連接激酶對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)特征的影響[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2013年06期

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本文編號(hào)：1692759