發(fā)布時間：2018-03-31 10:09

  本文選題：支氣管哮喘　切入點：腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣2分子　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景支氣管哮喘是一種慢性氣道炎癥性疾病。大量研究表明,支氣管哮喘與高凝狀態(tài)密切相關(guān),哮喘炎癥與凝血功能紊亂相互作用,共同促進(jìn)支氣管哮喘發(fā)生發(fā)展。組織因子(tissue factor,TF)是外源性凝血途徑的重要啟動子,也是連接凝血與炎癥網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的關(guān)鍵分子。TF除了其促凝活性,還可與相應(yīng)配體結(jié)合,激活脈管系統(tǒng)中炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。反過來,炎癥因子可促進(jìn)上皮細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)TF。研究表明,哮喘患者血漿TF含量和活性升高,加重哮喘病情,促進(jìn)氣道重塑。盡管如此,TF在支氣管哮喘凝血與炎癥過程中的作用機制仍需大量研究進(jìn)行闡明。凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)是血小板α顆粒中的糖基質(zhì)蛋白。在炎癥因子的誘導(dǎo)下,TSP-1可由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌釋放至血液循環(huán),參與血小板黏附與聚集,在血栓性疾病中發(fā)揮重要作用。TSP-1可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞趨化至炎性部位,進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)。研究表明,TSP-1在多種肺疾病如慢性阻塞性肺疾病、慢性肺心病中異常表達(dá),但其在支氣管哮喘中的研究較少。腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣因子2(tumor necrosis factorαinduced protein-8 like-2,TIPE2)是新近發(fā)現(xiàn)的免疫負(fù)性調(diào)節(jié)分子,主要表達(dá)在免疫細(xì)胞如淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,其在調(diào)節(jié)免疫平衡和炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用。研究表明,TIPE2在兒童哮喘患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中表達(dá)下降,在臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中TIPE2可通過p38MAPK以及ERK1/2信號通路調(diào)節(jié)TF的表達(dá)。但在哮喘中TIPE2與凝血物質(zhì)之間的關(guān)系尚未明確。本研究旨在探討哮喘患者PBMCs中TIPE2、TF及血漿中TF、TSP-1的表達(dá)情況及TIPE2與凝血物質(zhì)TF、TSP-1的相關(guān)性。此外,由于屋塵螨是最常見、危害最大的室內(nèi)變應(yīng)原,是哮喘在世界范圍內(nèi)的重要發(fā)病原因。且血源性TF主要來源于單核細(xì)胞,單核細(xì)胞來源的TF微粒活性最強。TIPE2、TF在一定條件下均可在單核細(xì)胞中表達(dá)。因此我們選取單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞作為載體,探討屋塵螨提取液(house dust mite extract,HDME)刺激下THP-1細(xì)胞中TIPE2和TF的表達(dá)及相關(guān)機制。目的研究TIPE2與支氣管哮喘患者凝血物質(zhì)TF、TSP-1的相關(guān)性;并進(jìn)一步探討屋塵螨提取液刺激的THP-1細(xì)胞中TIPE2和TF的表達(dá)及相關(guān)信號通路變化,為支氣管哮喘的診斷和治療提供新思路。材料與方法1.收集2015年12月~2016年6月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診及住院確診的支氣管哮喘患者65例作為病例組,同時納入同時期年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義的健康體檢者40例作為健康對照組。2.采用Western blot檢測哮喘病例組和健康對照組PBMCs中TIPE2、TF蛋白表達(dá)水平。3.采用ELISA檢測哮喘患者和健康者血漿中TF、TSP-1的表達(dá)水平。4.采用RT-PCR檢測屋塵螨提取液刺激THP-1細(xì)胞后,THP-1細(xì)胞中TIPE2、TF mRNA的表達(dá)水平。5.采用western blot檢測屋塵螨提取液刺激THP-1細(xì)胞后,p38MAPK、NF-κB信號通路蛋白的變化情況。結(jié)果第一部分支氣管哮喘患者TIPE2與TF、TSP-1中的表達(dá)及相關(guān)性研究1.與健康對照相比,哮喘患者PBMCs中TIPE2蛋白表達(dá)水平降低(p0.01),TF蛋白表達(dá)水平明顯升高(p0.01)。2.與健康對照相比,哮喘患者血漿中TF、TSP-1蛋白表達(dá)水平均明顯升高(p0.01)。3.支氣管哮喘患者PBMCs中TIPE2蛋白表達(dá)水平與PBMCs和血漿中TF蛋白表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.3828,p0.01;r=-0.5422,p0.01)。此外,PBMCs中TIPE2蛋白表達(dá)水平與患者血漿中TSP-1蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.3013,p0.05)。第二部分屋塵螨提取液刺激THP-1細(xì)胞后TIPE2、TF的表達(dá)及p38MAPK/NF-κB信號通路變化研究1.不同濃度(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)屋塵螨提取液刺激THP-1細(xì)胞4h后,TIPE2 mRNA相對表達(dá)量降低,TF mRNA相對表達(dá)量升高(p0.05),且在刺激濃度1μg/ml時變化最為明顯(p0.05)。選用1μg/ml屋塵螨提取液刺激THP-1細(xì)胞不同時間(1h,2h,4h,8h)后,TIPE2 mRNA相對表達(dá)水平下降(p0.05),TF mRNA相對表達(dá)水平升高(p0.05),且在刺激4h時最為顯著(p0.05)。2.1μg/ml屋塵螨提取液刺激THP-1不同時間后(0min,15min,30min,1h),p38MAPK、NF-κB蛋白磷酸化水平隨著時間的增加表達(dá)逐漸增高,且在1h時升高最明顯。結(jié)論1.哮喘患者PBMCs中TIPE2蛋白表達(dá)水平降低、TF蛋白表達(dá)水平升高,血漿中TF、TSP-1蛋白水平升高。哮喘患者PBMCs中TIPE2與凝血物質(zhì)TF、TSP-1水平呈負(fù)相關(guān)。提示TIPE2可能通過與TF、TSP-1相互作用參與哮喘患者高凝狀態(tài)。2.初步證實屋塵螨提取液可誘導(dǎo)THP-1中TIPE2 mRNA表達(dá)水平降低,TF mRNA表達(dá)水平升高,且可引起THP-1細(xì)胞中p38MAPK、NF-κB蛋白磷酸化信號增強。
[Abstract]:In this study , the expression of TF , TSP - 1 and TF , TSP - 1 in peripheral blood mononuclear cells ( PBMCs ) of asthmatic patients were studied . Objective To study the expression of TIIIand TF mRNA in PBMCs of patients with asthma and to investigate the expression of TIA2 and TF in patients with asthma . p0.05). 1 . Compared with TF and TSP - 1 , the expression level of TIMP - 2 mRNA and TF mRNA in PBMCs of patients with asthma were significantly decreased ( P < 0.05 ) , and the level of TF and TSP - 1 in PBMCs of asthmatic patients increased significantly ( P < 0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R562.25

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本文編號：1690269