本文選題：紅斑狼瘡　切入點(diǎn)：系統(tǒng)性　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種可累及多種器官的自身免疫病,常伴有腎臟損害,皮膚炎癥,血細(xì)胞減少等癥狀。研究表明B細(xì)胞參與了SLE的發(fā)病,而B(niǎo)細(xì)胞的活化、增殖和分化主要受B細(xì)胞抗原受體(B cell antigen receptor,BCR)信號(hào)通路調(diào)控。其中Bruton酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)是BCR信號(hào)通路的下游分子之一,是一種非受體酪氨酸激酶。文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)C57BL/6小鼠的CD19+細(xì)胞過(guò)表達(dá)Btk時(shí),會(huì)出現(xiàn)抗核抗體(Anti-nuclear antibody,ANA)以及狼瘡樣癥狀。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilical cord mesenchymal stem cell,UC-MSC)是一種多潛能的干細(xì)胞,在特定條件下可分化成多種細(xì)胞,同時(shí)它還具有免疫抑制和修復(fù)功能,所以目前已被用于治療多種自身免疫性疾病。目的:本研究旨在探索Btk在SLE中的異常表達(dá),分析其與SLE的相關(guān)性,并進(jìn)一步探討UC-MSC對(duì)SLE患者B細(xì)胞中Btk的調(diào)節(jié)作用。方法:采用Ficoll法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Btkhigh B細(xì)胞的百分率。酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)患者血清抗雙鏈DNA(Double-strands DNA,dsDNA)抗體含量。結(jié)合SLE患者臨床檢查資料,分析Btkhigh B細(xì)胞百分率與SLE患者的病情活動(dòng)評(píng)分(SLE disease activity index,SLEDAI)、血清補(bǔ)體C3、C4水平、血清抗dsDNA抗體含量、血沉(Erythrocyte sedientation rate,ESR)、24小時(shí)尿蛋白(Urine protein)的相關(guān)性。免疫磁珠分選SLE患者和健康對(duì)照外周血B細(xì)胞以及MRL/lpr小鼠和C57BL/6小鼠脾臟B細(xì)胞。免疫印跡法(Western blot,WB)檢測(cè)B細(xì)胞的Btk表達(dá)。免疫組化檢測(cè)狼瘡性腎炎患者以及腎癌患者癌旁組織的腎小球中Btk的表達(dá),用平均光密度值(mean optical density,MOD)表示。PBMCs經(jīng)CpG2395(2.5μg/ml),anti-CD40(3μg/ml),F(ab’)2 anti-human IgM(2μg/ml),IL-4(50ng/ml)共同刺激后,分別在與UC-MSC直接接觸共培養(yǎng)(10:1)、160μmol/L環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)、1μmol/地塞米松(Dexamethasone,DEX)及1μmol/L RN486(Btk抑制劑)條件下培養(yǎng)72小時(shí)后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Btkhigh B細(xì)胞的比例。結(jié)果:SLE患者外周血Btkhigh細(xì)胞百分率較正常人顯著升高(1.74%±0.15%vs0.86%±0.06%,p0.001),Btkhigh B細(xì)胞的百分率較正常對(duì)照組顯著升高(3.89%±0.31%vs 2.61%±0.21%,p0.01),并且與SLEDAI(r=0.53,p0.01)、血清抗dsDNA抗體水平(r=0.41,p0.05)以及24小時(shí)尿蛋白量(r=0.59,p0.05)呈正相關(guān),與血清補(bǔ)體C3水平(r=-0.41,p0.05)呈負(fù)相關(guān),但與血清補(bǔ)體C4水平和ESR無(wú)相關(guān)性。免疫印跡法顯示SLE患者外周血B細(xì)胞中的Btk與正常對(duì)照相比有升高的趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而MRL/Lpr狼瘡鼠脾臟B細(xì)胞Btk的表達(dá)較C57BL/6小鼠顯著升高。我們分析SLE患者的臨床癥狀發(fā)現(xiàn)狼瘡性腎炎患者的外周血Btkhigh B細(xì)胞的百分率較無(wú)狼瘡性腎炎的SLE患者顯著升高(4.71%±0.481%vs 3.19%±0.30%,p0.05)。免疫組化結(jié)果顯示狼瘡性腎炎(Lupus nephritis,LN)患者腎小球中Btk的表達(dá)顯著高于腎癌患者癌旁組織腎小球Btk的表達(dá)(0.03±0.003 vs 0.01±0.002,p0.001)。用CpG2395,anti-CD40,F(ab’)2anti-human IgM和IL-4共同刺激正常人外周血PBMCs72小時(shí)后,Btkhigh B細(xì)胞百分率顯著高于對(duì)照組(40.63%±10.84%vs 3.17%±0.25%,p0.05),且Btk在B細(xì)胞中的平均熒光強(qiáng)度(Mean fluorescent intensity,MFI)在刺激后也顯著升高(12.53±0.30 vs 9.58±0.79,p0.05)。將SLE患者外周血PBMCs與UC-MSC以1:10的比例共培養(yǎng)三天后,其Btkhigh B細(xì)胞的百分率較對(duì)照組明顯減少(29.00%±1.34%vs 50.03%±4.69%,p0.05)。同樣,UC-MSC也可以顯著抑制正常人外周血Btkhigh B細(xì)胞(16.90%±1.65%vs 39.48%±1.14%,p0.001)。而目前臨床上用于治療SLE的DEX和CTX均不能抑制Btkhigh B細(xì)胞百分率。結(jié)論:狼瘡性腎炎患者中Btk的表達(dá)顯著升高,且Btkhigh B細(xì)胞的百分率與SLE患者的病情活動(dòng)有關(guān),提示Btk可能成為治療SLE的新靶點(diǎn)。UC-MSC可以抑制B細(xì)胞中Btk的表達(dá)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,可能為其治療SLE的機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.241

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本文編號(hào)：1673700