發(fā)布時間：2018-03-23 23:24

  本文選題：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎　切入點：白藜蘆醇　出處：《四川醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)作為彌漫性結(jié)締組織疾病之一,已成為世界范圍內(nèi)的健康問題,嚴重影響病人及其家人的生活質(zhì)量及身心健康。RA是一種慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病,主要以關(guān)節(jié)滑膜為主要靶組織。介導(dǎo)關(guān)節(jié)破壞的主要細胞為成纖維樣滑膜細胞,主要病理表現(xiàn)為滑膜組織異常增殖、滑膜下層炎癥侵潤,滑膜炎可引起關(guān)節(jié)中骨與軟骨的持續(xù)損害,RA發(fā)病機制至今尚未完全明確。RA的發(fā)病與多種細胞因子相關(guān),腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)是其中重要參與因子之一。目前,對RA的主要研究集中于滑膜細胞中異常的信號途徑,Wnt信號通路在多種細胞增殖與分化方面有著關(guān)鍵調(diào)控作用,在RA滑膜炎癥以及調(diào)節(jié)骨代謝過程中起重要作用,其中Wnt/β-catenin信號通路目前研究最為詳盡,鑒于Wnt信號通路在RA的FLS中的重要調(diào)控作用,干預(yù)Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的各個環(huán)節(jié)成為治療RA的新靶點。白藜蘆醇(resveratrol,Res)廣泛存在于虎杖、花生及葡萄等植物當(dāng)中,是多酚類化合物之一,具有抗氧化、抗衰老、抗炎癥及保護心血管的作用,祖國醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)虎杖根(主要有效成分為白藜蘆醇)能治療關(guān)節(jié)的炎癥。近年研究者發(fā)現(xiàn)Res能誘導(dǎo)多種腫瘤細胞的凋亡,而RA中成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的增殖與分化類似于腫瘤細胞的特性。就此,本課題以滑膜細胞為研究對象,研究TNF-α對成纖維樣滑膜細胞的影響,從Wnt信號通路方面進一步研究白藜蘆醇對成纖維樣滑膜細胞作用可能的分子機制。目的:1.觀察TNF-α對人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞(Human Fibroblast-like synoviocyte of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)增殖的影響,以及觀察不同濃度的白藜蘆醇對TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA增殖的影響。2.觀察TNF-α對HFLS-RA中Wnt信號通路的調(diào)控,以及不同濃度的Res對TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA的Wnt信號通路的影響。方法:1.復(fù)蘇購買的HFLS-RA細胞株后,培養(yǎng)傳代至第3-5代備用。2.采用TNF-α(10μg/l)處理HFLS-RA24h后,運用CCK8法觀察TNF-α對HFLS-RA增殖的影響。3.不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)干預(yù)HFLS-RA后再用10μg/l的TNF-α刺激24h,用CCK8法測定Res對TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA生長的影響。4.將濃度為10μg/l的TNF-α加入HFLS-RA中共同孵育30min,運用Western-blot檢測其與空白對照組的s FRP4、β-catenin及C-myc蛋白的表達水平。5.將不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)與HFLS-RA共同孵育24h后,再用10μg/l的TNF-α刺激30min,用Western-blot檢測Res對TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA中s FRP4、β-catenin及C-myc蛋白表達的影響。結(jié)果:1.HFLS-RA由TNF-α誘導(dǎo)后,HFLS-RA增殖明顯增強,不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)對TNF-α誘導(dǎo)后的HFLS-RA增殖有抑制作用,并呈劑量依賴性。2.經(jīng)Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)TNF-α誘導(dǎo)后的HFLS-RA與空白對照組相比較,s FRP4的表達水平降低,β-catenin及C-myc的表達水平增高。(P0.05)3.與TNF-α組相比較,經(jīng)Western-blot方法分析顯示:不同濃度Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)組能降低TNF-α誘導(dǎo)后的HFLS-RA的β-catenin及C-myc的蛋白表達水平,s FRP4的表達水平增高。(P0.05)結(jié)論:1.TNF-α有促進HFLS-RA增殖的作用。2.Res能抑制TNF-α誘導(dǎo)HFLS-RA增殖的作用,并呈劑量依賴性。3.TNF-α能明顯提高HFLS-RA的Wnt信號通路的活化水平。4.Res能夠劑量依耐性的抑制TNF-α誘導(dǎo)后HFLS-RA中的Wnt信號通路的活化水平。
[Abstract]:Background: rheumatoid arthritis (rheumatoid arthritis, RA) as one of the diffuse connective tissue disease, has become a worldwide health problem, seriously affecting the quality of life of patients and their families and health.RA is a chronic systemic autoimmune disease, mainly in the synovial membrane as the main target tissue. The main cell mediated joint destruction for fibroblast like synovial cells, is characterized by abnormal proliferation of synovial tissue, suhsynovial inflammatory infiltration, synovitis can cause sustained damage to bone and cartilage joint, RA pathogenesis has not yet entirely clear and the incidence of.RA related cytokines, tumor necrosis factor alpha (tumor necrosis factor alpha, TNF- alpha) is one of the important factors involved in one. At present, the main research on the RA signal pathway in synovial cells, Wnt signaling pathway in a cell proliferation and A key role of differentiation, play an important role in the regulation of bone metabolism and RA synovitis of the Wnt/ beta -catenin signal pathway on the most detailed, in view of the important role of Wnt signaling pathway in RA FLS, each link of intervention in the Wnt signal transduction pathway has become a new target for treatment of RA. Resveratrol (resveratrol, Res) widely exists in Polygonum cuspidatum, peanut and grape plants, is one of the polyphenolic compounds with antioxidant, anti-aging, anti-inflammatory and cardiovascular protection effect, Chinese Medicine found the root of Polygonum cuspidatum (the main active ingredients of resveratrol can treat inflammation) in recent years, joint. Found that Res can induce apoptosis in various tumor cells, and RA in fibroblast like synoviocytes (fibroblast-like synoviocytes, FLS) the characteristics of proliferation and differentiation of tumor cells. It is similar to this, this topic in synovium Cell as the research object, research TNF- alpha on the proliferation of fibroblast like synovial cells, resveratrol on molecular mechanism of fibroblast like synoviocytes from Wnt signaling pathway may further study. Objective: 1. to observe the effect of TNF- on human rheumatoid arthritis synovial fibroblasts (Human Fibroblast-like synoviocyte of rheumatoid arthritis, HFLS-RA) proliferation and effect observation of different concentrations of resveratrol on TNF- induced proliferation of HFLS-RA.2. to observe the regulation of TNF- alpha on Wnt signaling pathway in HFLS-RA, and the effect of Wnt signaling pathway in different concentrations of Res on TNF- induced by HFLS-RA. Methods: 1. HFLS-RA cells were purchased after recovery. Train passage to the 3-5 generation of alternate.2. by TNF- alpha (10 g/l) after HFLS-RA24h treatment, using CCK8 method to observe the effect on proliferation of HFLS-RA TNF- alpha.3. of different concentrations of Res (50umol/l, 100umol/l, 20 0umol/l, 400umol/l and HFLS-RA) after the intervention of 10 g/l TNF- stimulated 24h, CCK8 method was used to determine the effect of.4. Res on TNF- induced growth of HFLS-RA concentration is 10 g/l TNF- for HFLS-RA with alpha join 30min, using Western-blot to detect the s and control group FRP4, -catenin and beta C-myc protein expression level of.5. in different concentration of Res (50umol/l, 100umol/l, 200umol/l, 400umol/l) HFLS-RA were incubated with 24h, and 10 g/l TNF- stimulated 30min on TNF- induced by Western-blot Res HFLS-RA s FRP4 detection, the expressions of -catenin and C-myc protein beta. Results: 1.HFLS-RA induced by TNF- alpha, HFLS-RA proliferation was significantly enhanced, different concentrations of Res (50umol/l, 100umol/l, 200umol/l, 400umol/l) inhibited TNF- alpha induced HFLS-RA proliferation in a dose-dependent manner.2. was detected on Western-blot induced by TNF- after H FLS-RA compared with the control group, the expression level of s decreased FRP4, increased the expression level of -catenin beta and C-myc. (P0.05) 3. and TNF- alpha group compared with the Western-blot method analysis showed that: different concentrations of Res (50umol/l, 100umol/l, 200umol/l, 400umol/l) expression levels of beta -catenin and C-myc group can reduce TNF- after the induction of HFLS-RA alpha protein, increased the expression level of s FRP4 (P0.05). Conclusion: 1.TNF- can promote the proliferation of HFLS-RA alpha.2.Res can inhibit TNF- induced HFLS-RA proliferation in a dose-dependent manner.3.TNF- can significantly improve the level of.4.Res alpha activation of Wnt signaling pathway to HFLS-RA high dose according to activation the level of Wnt signaling pathway inhibited TNF- induced tolerance in HFLS-RA.

【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R593.22

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