本文選題：糖尿病　切入點：認知障礙　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:認知功能障礙是糖尿病最嚴重的并發(fā)癥之一,其主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)、記憶能力的下降。海馬的突觸可塑性是學(xué)習(xí)、記憶形成的分子基礎(chǔ),而α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異唑-丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate receptor,AMPAR)是調(diào)節(jié)突觸可塑性的重要因子。AMPAR數(shù)量及傳導(dǎo)效能的改變可直接影響學(xué)習(xí)記憶能力。丁苯酞因其神經(jīng)保護作用已廣泛應(yīng)用于缺血性腦血管病。本實驗旨在通過對鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)糖尿病大鼠預(yù)防性應(yīng)用丁苯酞,觀察其對糖尿病認知功能障礙及AMPAR表達的影響。方法:1制備STZ糖尿病大鼠模型及分組55只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(體重110g~130g),隨機分為正常對照組(NC組,n=10只)和糖尿病組(DM,n=45只)。STZ糖尿病大鼠模型的制備:給予糖尿病大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素60mg/kg,72h后測尾靜脈血糖,若血糖≥16.7mmol/L,則納入STZ糖尿病大鼠組。將造模成功的STZ大鼠隨機分為糖尿病對照組(DC,n=15),糖尿病丁苯酞低劑量組(DL,n=15),糖尿病丁苯酞高劑量組(DH,n=15)。2藥物干預(yù)造模成功后第一天,給予DL組、DH組大鼠溶解于玉米胚芽油的丁苯酞灌胃,劑量分別為DL(60mg/Kg/d)、DH(120mg/Kg/d),NC組及DC組用等量玉米胚芽油灌胃,每日1次,連續(xù)12周。3一般情況觀察每周檢測大鼠的血糖及體重情況。同時記錄大鼠精神狀態(tài)、毛發(fā)色澤及飲食、尿量等一般情況。4行為學(xué)檢測各組大鼠于丁苯酞干預(yù)12周后進行Morris水迷宮實驗,首先連續(xù)5天行定位航行實驗,記錄逃避潛伏期;再于第6天行空間探索實驗,讓其自由游泳60s,記錄60s內(nèi)穿越平臺的次數(shù)。5觀察指標水迷宮結(jié)束后第1天處死大鼠,取大鼠海馬組織,經(jīng)HE染色觀察海馬組織形態(tài);行RT-PCR檢測AMPAR的m RNA水平;應(yīng)用免疫組織化學(xué)分析、蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測細胞AMPAR的蛋白水平的表達。6統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,應(yīng)用完全隨機設(shè)計的單因素方差分析、重復(fù)測量數(shù)據(jù)多重比較配對的t檢驗法(Bonferroni法)及多元方差分析進行統(tǒng)計,結(jié)果應(yīng)用均數(shù)±標準差(x±s)表示,P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1一般情況觀察1.1一般狀態(tài)NC組大鼠精神狀態(tài)良好、反應(yīng)靈敏、色澤光亮、進食水及尿量正常,體重穩(wěn)定增長;DC組、DH組和DL組大鼠則出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、毛發(fā)稀疏枯黃、多尿多飲、體型瘦弱及體重下降等現(xiàn)象。1.2血糖NC組大鼠血糖正常;DC組、DH組和DL組大鼠血糖明顯升高(20.0mmol/l)。造模前,NC組與DC組大鼠血糖均正常,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(7.20±0.54 vs 7.19±0.68,P0.05);大鼠體重差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(131.67±4.85 vs 133.05±4.39,P0.05)。造模成功后12W末,與NC組相比,DC組、DH組和DL組大鼠血糖均顯著增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(7.42±0.65 vs 31.21,28.67±1.95,29.54±2.69,P0.01);體重則明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(345.23±5.57 vs 232.34±12.96,246.14±13.87,244.52±14.40,P0.01)。但DC組、DH組和DL組各組間的血糖及體重相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2行為學(xué)測試結(jié)果2.1基礎(chǔ)游泳速度為排除大鼠的個體差異,在水迷宮測試前,讓其自由游泳60S,了解各組大鼠的基礎(chǔ)游泳速度,結(jié)果顯示各組大鼠基礎(chǔ)游泳速度間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2.2定位航行實驗2.2.1測試第1天各組大鼠逃避潛伏期未見明顯差異(P0.05)。2.2.2測試第2-5天與NC組相比,DL組、DH組及DC組逃避潛伏期延長(P0.05);與DC組相比,DL組、DH組逃避潛伏期縮短(P0.05);與DL組相比,DH組逃避潛伏期縮短(P0.05)。NC組、DH組及DL組不同天數(shù)的潛伏期有統(tǒng)計學(xué)意義,趨勢為:第1天第2天第3天第4天第5天,天數(shù)和分組之間不存在交互作用(P0.05)。DC組不同天數(shù)的潛伏期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.3空間探索實驗四組大鼠間比較,穿越平臺次數(shù)依次減少:NC組DH組DL組DC組。3 HE染色結(jié)果正常對照組大鼠海馬CA1區(qū)未觀察到病理性改變,神經(jīng)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,排列整齊,核大而圓;糖尿病組神經(jīng)元細胞排列紊亂,數(shù)目減少,出現(xiàn)空泡變性,細胞核固縮等。丁苯酞治療組細胞改變較糖尿病對照組減輕,且丁苯酞高劑量組較丁苯酞低劑量組改變明顯。4 Rt-PCR結(jié)果四組間比較,海馬AMPAR的m RNA表達量依次減少:NC組DH組DL組DC組。5 Western blot結(jié)果DC組DH組和DL組的AMPAR蛋白表達量低于NC組(P0.05),且DH組和DL組的AMPAR蛋白表達量與DC組相比均增高(P0.05);其中,DH組的AMPAR蛋白表達量較DL組更加顯著(P0.05)。6免疫組化結(jié)果DM組海馬AMPAR細胞的表達量較NC組降低(P0.05),DH組和DL組的AMPAR細胞的表達量均較DC組增高(P0.05);DH組的AMPAR細胞表達量高于DL組(P0.05)。結(jié)論:1 STZ糖尿病大鼠成模12周時出現(xiàn)認知功能障礙,學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降;且海馬組織中AMPAR表達下降。2應(yīng)用丁苯酞能改善STZ糖尿病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,提高海馬AMPAR的表達水平,預(yù)防糖尿病認知障礙的發(fā)生,并且丁苯酞高劑量優(yōu)于丁苯酞低劑量。
[Abstract]:Objective: cognitive dysfunction is one of the most serious complications of diabetes, the main performance for the study, the decline in memory. The synaptic plasticity in the hippocampus is to study the molecular basis of memory formation, and alpha amino -3- hydroxy -5- methyl isoxazole propionate (-4- - alpha -amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxa-zolep-propionate receptor, AMPAR) is an important regulation of synaptic plasticity. The number of factor.AMPAR and conduction efficiency change can directly affect the ability of learning and memory. Because of the neuroprotective effect of butylphthalide has been widely used in ischemic cerebrovascular disease. This experiment aims to streptozotocin (streptozotocin, STZ) in diabetic rats prophylactic application of butylphthalide, observe its effects on diabetic cognitive dysfunction and expression AMPAR. Method: 1 Preparation of group STZ diabetic rats model and 55 healthy male Sprague-Dawley (SD) rats (weight 110g~130g) were randomly divided. 涓烘甯稿鐓х粍(NC緇，

本文編號：1592366