發(fā)布時(shí)間：2018-03-03 21:03

  本文選題：腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣因子2　切入點(diǎn)：細(xì)胞凋亡　出處：《山東大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子-2 (tumor necrosis factor-α induced protein 8 like-2,TIPE2)作為近年新發(fā)現(xiàn)的負(fù)性炎性因子,是維持體內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)所必需的蛋白之一。同時(shí),TIPE2能通過(guò)與caspase-8結(jié)合,促進(jìn)Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和T細(xì)胞活化誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。高糖環(huán)境下,不僅起引起的胰島素抵抗刺激細(xì)胞炎癥反應(yīng),還可以通過(guò)LRP-1介導(dǎo)的Aβ1-40轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制障礙,影響Aβ1-40的清除。Aβ沉積時(shí),Aβ原纖維可以激活小膠質(zhì)細(xì)胞引起炎癥反應(yīng)和神經(jīng)毒性因子的釋放。但高糖、Aβ對(duì)大鼠神經(jīng)細(xì)胞TIPE2的表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響尚未系統(tǒng)研究。過(guò)氧化物酶增殖體激活受體(PPARy)激動(dòng)劑和胰島素是臨床常用的糖尿病治療藥物,可以通過(guò)降低血糖改善高糖引起的炎癥反應(yīng),本身也可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),但其對(duì)TIPE2和細(xì)胞凋亡的影響尚未見(jiàn)諸報(bào)道。但本課題擬通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn),觀察PPARγ激動(dòng)劑、胰島素干預(yù)前后高糖環(huán)境、Aβ1-40對(duì)大鼠神經(jīng)細(xì)胞TIPE2表達(dá)和細(xì)胞凋亡的影響,探討TIPE2在糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的作用。方法：(1)選取3月齡Wistar大鼠作為空白對(duì)照組(3 Wistar組),自發(fā)性2型糖尿病大鼠分為3月齡組(3GK組)、6月齡組(6GK組)、羅格列酮干預(yù)6月齡組(RSG+6GK組)、胰島素干預(yù)6月齡組(INS+6GK組)。(2) 運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)腦組織中TIPE2的表達(dá)及空間分布,RT-PCR、 Western Blot法分別測(cè)定TIPE2的mRNA、蛋白表達(dá)水平,TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。(3)選取24h內(nèi)新生Wistar大鼠提取大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞,分為五組,分別采用高糖、羅格列酮、比格列酮、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40干預(yù),每組三個(gè)濃度,而后每種物質(zhì)取中間濃度兩兩聯(lián)合干預(yù)。(4)運(yùn)用RT-qPCR、Western Blot法分別測(cè)定大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞中TIPE2的mRNA、蛋白表達(dá)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。(5)采用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有數(shù)據(jù)以萬(wàn)±s表示,多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析,組間差異比較采用兩樣本f檢驗(yàn),相關(guān)性采取Person相關(guān)性分析,a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：(1) TIPE2在腦組織中,分布于活化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元的胞漿和微血管管壁。比較TIPE2在各組大鼠腦內(nèi)的表達(dá),3GK組在染色強(qiáng)度、陽(yáng)染細(xì)胞數(shù)、陽(yáng)染血管數(shù)、mRNA、蛋白水平均較3 Wistar組有明顯增加(P0.05),6GK組均較3GK組有明顯增加(P0.05), RSG+6GK組、INS+6GK組均較6GK組有明顯減少(P0.05)。(2)3GK組與3 Wistar組相比細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增加(P0.05),6GK組與3GK組相比凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加(P0.05)。與6GK組相比,RSG+6GK組和INS+6GK組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05)。(3)通過(guò)Person相關(guān)性分析,在不同大鼠的腦內(nèi),TIPE2與細(xì)胞凋亡數(shù)呈正相關(guān)性(r=0.9816,P0.05)。(4)高糖、羅格列酮、比格列酮、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40單獨(dú)干預(yù)大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞,TIPE2的表達(dá)均明顯增加(P0.05),隨著濃度的增加,TIPE2的表達(dá)增加無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(5)高糖、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40兩兩聯(lián)合干預(yù)時(shí),TIPE2的表達(dá)均明顯增加較單獨(dú)干預(yù)增加(P0.05),而羅格列酮、比格列酮可抑制高糖、纖絲狀A(yù)B1-40、寡聚體Aβ1-40引起的TIPE2表達(dá)增加(P0.05)。(6)高糖、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40單獨(dú)干預(yù)大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞凋亡和死亡數(shù)明顯增加(P0.05),隨著濃度的增加,凋亡和死亡數(shù)也增加。羅格列酮、比格列酮單獨(dú)干預(yù)大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞凋亡和死亡數(shù)變化無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(7)高糖、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40兩兩聯(lián)合干預(yù)時(shí),凋亡和死亡數(shù)明顯增加較單獨(dú)干預(yù)增加(P0.05),而羅格列酮、比格列酮可抑制高糖、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40引起的細(xì)胞凋亡和死亡(P0.05)。結(jié)論：(1)Ⅱ型糖尿病可促進(jìn)大鼠腦組織內(nèi)TIPE2的表達(dá)和細(xì)胞凋亡,隨年齡的增長(zhǎng)和糖尿病病程的進(jìn)展,TIPE2的表達(dá)和細(xì)胞凋亡數(shù)目相應(yīng)增加,提示TIPE2可能參與調(diào)節(jié)糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。(2)胰島素、PPARγ激動(dòng)劑干預(yù)可減少糖尿病大鼠腦內(nèi)TIPE2的表達(dá)并抑制細(xì)胞凋亡,提示胰島素、PPARγ激動(dòng)劑作為臨床常用糖尿病治療藥物,不僅能夠降低血糖,還可以降低高血糖引起的炎癥反應(yīng)、減少細(xì)胞凋亡,減輕糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。(3)Ⅱ型糖尿病大鼠腦組織中TIPE2表達(dá)與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān),提示TIPE2可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡,參與糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。(4)高糖、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40單獨(dú)干預(yù)大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞,均可引起TIPE2表達(dá)升高和細(xì)胞凋亡,且兩兩聯(lián)合干預(yù)時(shí)TIPE2表達(dá)和細(xì)胞凋亡進(jìn)一步提高,提示Ⅱ型糖尿病不僅通過(guò)高糖也通過(guò)Aβ1-40途徑引起炎性反應(yīng)及糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。(5) PPARγ激動(dòng)劑(羅格列酮、吡格列酮)單獨(dú)干預(yù)大鼠海馬原代培養(yǎng)細(xì)胞,TIPE2的表達(dá)明顯增加,而細(xì)胞凋亡數(shù)目無(wú)變化,提示正常情況下PPARγ激動(dòng)劑可以通過(guò)提高負(fù)性炎癥因子的表達(dá)起抗炎作用且對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)影響。而在與高糖、纖絲狀A(yù)β1-40、寡聚體Aβ1-40聯(lián)合干預(yù)時(shí),可以降低其引起的TIPE2表達(dá)升高和細(xì)胞凋亡,提示PPARγ激動(dòng)劑可以分別抑制高糖、Aβ1-40引起炎性反應(yīng)及糖尿病中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1562675