本文關(guān)鍵詞： 蛋氨酸限制 脂代謝 氧化應(yīng)激 內(nèi)源性H_2S miR-328-3p　出處：《江南大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:高脂飲食會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體脂代謝紊亂和氧化還原狀態(tài)失衡。蛋氨酸限制可以減少高脂飲食下機(jī)體的脂肪積累和氧化應(yīng)激反應(yīng),但其機(jī)制尚需深入研究。研究發(fā)現(xiàn)硫化氫(H_2S)在降低機(jī)體氧化應(yīng)激、改善脂代謝紊亂等方面發(fā)揮著重要的作用。本文旨在研究蛋氨酸限制對高脂飲食小鼠脂代謝失調(diào)、氧化應(yīng)激的改善作用以及對內(nèi)源性H_2S的調(diào)節(jié)作用,探究蛋氨酸限制改善脂代謝和調(diào)控轉(zhuǎn)硫途徑的潛在機(jī)制。方法:60只C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分成3組:低脂正常飲食組(CON組,4%脂肪,0.86%蛋氨酸);高脂正常蛋氨酸飲食組(HF組:20%脂肪,0.86%蛋氨酸);高脂蛋氨酸限制飲食組(MR組:20%脂肪,0.17%蛋氨酸)。每周監(jiān)測體重,用CLAMS動(dòng)物代謝系統(tǒng)監(jiān)測小鼠的活體代謝狀態(tài)。分別隨機(jī)選出10只在11周和22周禁食8 h后處死,取血液和肝臟組織,觀察肝臟切片,測定血脂和肝臟脂肪含量,測定血漿和肝臟的氧化還原狀態(tài)相關(guān)指標(biāo);測定血漿和肝臟內(nèi)源性H_2S水平及肝臟轉(zhuǎn)硫途徑相關(guān)酶的活性;用q PCR技術(shù)測定肝臟脂代謝相關(guān)基因及轉(zhuǎn)硫途徑相關(guān)酶的m RNA表達(dá);用western blot測定轉(zhuǎn)硫途徑相關(guān)酶的蛋白表達(dá);用高通量測序技術(shù)對肝臟組織micro RNA(mi RNA)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序;用q PCR技術(shù)驗(yàn)證有差異mi RNAs的m RNA表達(dá);并用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測mi RNA-328-3p與胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的靶標(biāo)關(guān)系。結(jié)果:短期(11周)飼喂蛋氨酸限制飲食,HF組小鼠體重顯著高于CON組,而MR組小鼠體重顯著低于HF組。與HF組相比,飲食MR組小鼠血漿和肝臟中的甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)含量顯著降低;肝臟脂肪合成相關(guān)基因脂肪酸合成酶(FAS)m RNA的表達(dá)水平顯著降低,肝臟脂肪分解相關(guān)基因肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)和過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)m RNA的表達(dá)水平顯著增加;血漿丙二醛(MDA)含量顯著降低,血漿和肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性顯著增加;肝臟內(nèi)源性H_2S、CSE m RNA和蛋白表達(dá)水平顯著增加;肝臟mi R-328-3p、mi R-872-5p和mi R-30c-5p m RNA的表達(dá)水平顯著降低。中長期(22周)飼喂蛋氨酸限制飲食,HF組小鼠體重顯著高于CON組。與HF組相比,MR組小鼠體重、血漿和肝臟中的TG和TC含量顯著降低;肝臟脂肪合成相關(guān)基因FAS、乙酰輔酶A羧化酶1(ACC1)和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(SREBP1c)m RNA的表達(dá)水平顯著下調(diào),脂肪分解相關(guān)基因膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)、CPT1和PPARαm RNA的表達(dá)水平顯著上調(diào);血漿中總抗氧化能力(T-AOC)、GSH-Px活性和還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值顯著增加,MDA水平顯著下降;肝臟中TAOC和GSH-Px活性顯著增加,MDA含量和GSH/GSSG比值顯著降低;血漿和肝臟H_2S含量顯著增加;肝臟CSE酶活、CSE m RNA和CSE蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào);肝臟中mi R-328-3p和mi R-194-5p m RNA的表達(dá)水平顯著下調(diào)。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)結(jié)果顯示,在293FT細(xì)胞中轉(zhuǎn)染突變型CSE 3’-UTR載體質(zhì)粒,mi R-328-3p組與NC組的相對熒光素酶活性值無顯著性差異;轉(zhuǎn)染CSE 3’-UTR載體質(zhì)粒,mi R-328-3p組的相對熒光素酶活性與NC組相比顯著被抑制,說明mi R-328-3p與CSE m RNA的3’-UTR存在特異性的結(jié)合位點(diǎn),可以特異性調(diào)控CSE m RNA轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)。結(jié)論:高脂飲食導(dǎo)致小鼠氧化還原狀態(tài)失衡,抑制了內(nèi)源性H_2S的產(chǎn)生,造成了脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)失調(diào),最終導(dǎo)致小鼠體重顯著增加;mi R-328-3p與CSE m RNA的3’-UTR存在特異性的結(jié)合位點(diǎn),短期和中長期的蛋氨酸限制飲食通過抑制肝臟mi R-328-3p的表達(dá),提高了CSE的蛋白表達(dá),增加內(nèi)源性H_2S的生成,從而顯著抑制了氧化應(yīng)激,并改善了高脂飲食小鼠誘導(dǎo)的脂代謝紊亂。
[Abstract]:Objective : To study the effects of methionine on lipid metabolism and oxidative stress in rats with high fat diet . The mechanism of methionine restriction on lipid metabolism disturbance , oxidative stress and regulation of endogenous H _ 2S were studied . In comparison with HF group , the levels of triglyceride ( TG ) and total cholesterol ( TC ) in liver tissues were significantly lower than those in the HF group , and the levels of triglyceride ( TG ) and total cholesterol ( TC ) in liver tissues were significantly lower than those in the HF group . The results showed that high - fat diet resulted in a significant increase in the expression level of mRNA in liver , and the expression level of MDA and GSH - Px were significantly decreased . The results showed that high - fat diet resulted in a significant increase in the expression level of mRNA in the liver . The results showed that high - fat diet resulted in a significant increase in the expression of endogenous H _ 2S .

【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R589.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1547858