本文關(guān)鍵詞： chemerin 糖尿病腎病 腎功能不全 炎癥 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的:本實(shí)驗(yàn)通過研究相關(guān)因子在大鼠系膜細(xì)胞及糖尿病腎功能不全大鼠模型中的表達(dá),探討chemerin對(duì)TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路及炎癥因子的影響,闡明其在糖尿病腎病腎功能不全發(fā)病中的作用;同時(shí)通過分析腎功能衰竭患者臨床生化指標(biāo),探索血清chemerin與腎功能衰竭患者的相關(guān)關(guān)系。研究方法:1、根據(jù)gene bank合成大鼠chemerin基因序列,在兩端添加Hind III和Bam H I的酶切位點(diǎn),對(duì)pc DNA?3.1(+)表達(dá)載體和chemerin全長(zhǎng)同時(shí)進(jìn)行雙酶切后進(jìn)行連接,構(gòu)建chemerin表達(dá)載體。篩選陽(yáng)性克隆,進(jìn)行鑒定。2、以大鼠腎臟系膜細(xì)胞為研究對(duì)象,隨機(jī)分為對(duì)照組、低糖組、高糖組、chemerin組、聯(lián)合干預(yù)組。利用構(gòu)建的chemerin表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染系膜細(xì)胞,應(yīng)用Real-time PCR方法檢測(cè)TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路m RNA水平,用Western blot法檢測(cè)TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路蛋白表達(dá)情況,并進(jìn)行半定量分析;使用ELISA法測(cè)定炎癥因子TNF-α、IL-1的水平,探討體外試驗(yàn)chemerin對(duì)于炎癥因子、TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路的影響。3、以糖尿病腎功能不全大鼠為研究對(duì)象,分成正常對(duì)照組、生理鹽水組、糖尿病腎功能不全組、chemerin組、聯(lián)合干預(yù)組。利用構(gòu)建的chemerin表達(dá)載體,注入大鼠腎臟,應(yīng)用Real-time PCR方法檢測(cè)TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路m RNA水平,用Western blot法檢測(cè)TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路蛋白表達(dá)情況,并進(jìn)行半定量分析;同時(shí)使用ELISA法測(cè)定炎癥因子TNF-α、IL-1的水平,探討體內(nèi)試驗(yàn)chemerin對(duì)于炎癥因子、TGF-β1/Smads/CTGF信號(hào)通路的影響。4、隨機(jī)選取腎功能衰竭患者97名及45名健康對(duì)照者。根據(jù)腎功能衰竭的病因?qū)⒒颊叻殖商悄虿∧I病腎功能衰竭組(DKD)和非糖尿病腎病腎功能衰竭(NDKD)組。ELISA法檢測(cè)人血清chemerin水平,分析與腎功能衰竭患者臨床生化指標(biāo)的相關(guān)性,揭示兩者的聯(lián)系。研究結(jié)果:1、成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pc DNA?3.1(+)-chemerin,經(jīng)PCR、雙酶切鑒定證實(shí)目的片段與預(yù)期一致;通過測(cè)序證實(shí)序列與Gen Bank相一致。2、體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),高糖組及chemerin組大鼠系膜細(xì)胞中TGF-β1/Smads/CTGF通路各蛋白包括TGF-β1、Smad2、Smad4和CTGF m RNA及蛋白表達(dá)均有增加,炎癥因子TNF-α、IL-1水平升高;聯(lián)合干預(yù)組TGF-β1/Smads/CTGF通路及TNF-α、IL-1水平升高水平更明顯。3、大鼠體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn),糖尿病腎功能不全組及chemerin組中TGF-β1/Smads/CTGF通路各蛋白包括TGF-β1、Smad2、Smad4和CTGF m RNA及蛋白表達(dá)均有增加,炎癥因子TNF-α、IL-1水平升高。聯(lián)合干預(yù)組TGF-β1/Smads/CTGF通路及TNF-α、IL-1水平升高水平更明顯。4、相比于對(duì)照組,非糖尿病腎病腎功能衰竭(NDKD)組與糖尿病腎病腎功能衰竭(DKD)組的血清chemerin水平顯著升高,而糖尿病腎病腎功能衰竭(DKD)組的chemerin水平高于非糖尿病腎病腎功能衰竭(NDKD)組患者。女性患者的血清chemerin水平較男性患者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。簡(jiǎn)單線性回歸分析表明,校正年齡及性別兩個(gè)因素后,血清chemerin水平與SBP、BUN、Cr、TG、CRP呈正相關(guān),而與Ccr呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:1、成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pc DNA?3.1(+)-chemerin,為下一步轉(zhuǎn)染研究chemerin的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。2、chemerin可能通過上調(diào)TGF-β1/Smads/CTGF通路及炎癥因子水平加重大鼠系膜細(xì)胞損傷。3、chemerin可能通過上調(diào)TGF-β1/Smads/CTGF通路及炎癥因子水平加重大鼠腎臟損傷,導(dǎo)致腎功能障礙。4、糖尿病腎病腎功能衰竭組患者血清chemerin水平明顯升高,而且血清chemerin水平與腎功能密切相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R587.2;R692.5

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本文編號(hào)：1540541