本文關鍵詞： chemerin 糖尿病腎病 腎功能不全 炎癥 轉化生長因子-β1　出處：《天津醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究目的:本實驗通過研究相關因子在大鼠系膜細胞及糖尿病腎功能不全大鼠模型中的表達,探討chemerin對TGF-β1/Smads/CTGF信號通路及炎癥因子的影響,闡明其在糖尿病腎病腎功能不全發(fā)病中的作用;同時通過分析腎功能衰竭患者臨床生化指標,探索血清chemerin與腎功能衰竭患者的相關關系。研究方法:1、根據(jù)gene bank合成大鼠chemerin基因序列,在兩端添加Hind III和Bam H I的酶切位點,對pc DNA?3.1(+)表達載體和chemerin全長同時進行雙酶切后進行連接,構建chemerin表達載體。篩選陽性克隆,進行鑒定。2、以大鼠腎臟系膜細胞為研究對象,隨機分為對照組、低糖組、高糖組、chemerin組、聯(lián)合干預組。利用構建的chemerin表達載體,轉染系膜細胞,應用Real-time PCR方法檢測TGF-β1/Smads/CTGF信號通路m RNA水平,用Western blot法檢測TGF-β1/Smads/CTGF信號通路蛋白表達情況,并進行半定量分析;使用ELISA法測定炎癥因子TNF-α、IL-1的水平,探討體外試驗chemerin對于炎癥因子、TGF-β1/Smads/CTGF信號通路的影響。3、以糖尿病腎功能不全大鼠為研究對象,分成正常對照組、生理鹽水組、糖尿病腎功能不全組、chemerin組、聯(lián)合干預組。利用構建的chemerin表達載體,注入大鼠腎臟,應用Real-time PCR方法檢測TGF-β1/Smads/CTGF信號通路m RNA水平,用Western blot法檢測TGF-β1/Smads/CTGF信號通路蛋白表達情況,并進行半定量分析;同時使用ELISA法測定炎癥因子TNF-α、IL-1的水平,探討體內(nèi)試驗chemerin對于炎癥因子、TGF-β1/Smads/CTGF信號通路的影響。4、隨機選取腎功能衰竭患者97名及45名健康對照者。根據(jù)腎功能衰竭的病因將患者分成糖尿病腎病腎功能衰竭組(DKD)和非糖尿病腎病腎功能衰竭(NDKD)組。ELISA法檢測人血清chemerin水平,分析與腎功能衰竭患者臨床生化指標的相關性,揭示兩者的聯(lián)系。研究結果:1、成功構建真核表達載體pc DNA?3.1(+)-chemerin,經(jīng)PCR、雙酶切鑒定證實目的片段與預期一致;通過測序證實序列與Gen Bank相一致。2、體外試驗發(fā)現(xiàn),高糖組及chemerin組大鼠系膜細胞中TGF-β1/Smads/CTGF通路各蛋白包括TGF-β1、Smad2、Smad4和CTGF m RNA及蛋白表達均有增加,炎癥因子TNF-α、IL-1水平升高;聯(lián)合干預組TGF-β1/Smads/CTGF通路及TNF-α、IL-1水平升高水平更明顯。3、大鼠體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn),糖尿病腎功能不全組及chemerin組中TGF-β1/Smads/CTGF通路各蛋白包括TGF-β1、Smad2、Smad4和CTGF m RNA及蛋白表達均有增加,炎癥因子TNF-α、IL-1水平升高。聯(lián)合干預組TGF-β1/Smads/CTGF通路及TNF-α、IL-1水平升高水平更明顯。4、相比于對照組,非糖尿病腎病腎功能衰竭(NDKD)組與糖尿病腎病腎功能衰竭(DKD)組的血清chemerin水平顯著升高,而糖尿病腎病腎功能衰竭(DKD)組的chemerin水平高于非糖尿病腎病腎功能衰竭(NDKD)組患者。女性患者的血清chemerin水平較男性患者差異無統(tǒng)計學意義。簡單線性回歸分析表明,校正年齡及性別兩個因素后,血清chemerin水平與SBP、BUN、Cr、TG、CRP呈正相關,而與Ccr呈負相關。結論:1、成功構建真核表達載體pc DNA?3.1(+)-chemerin,為下一步轉染研究chemerin的作用機制奠定基礎。2、chemerin可能通過上調(diào)TGF-β1/Smads/CTGF通路及炎癥因子水平加重大鼠系膜細胞損傷。3、chemerin可能通過上調(diào)TGF-β1/Smads/CTGF通路及炎癥因子水平加重大鼠腎臟損傷,導致腎功能障礙。4、糖尿病腎病腎功能衰竭組患者血清chemerin水平明顯升高,而且血清chemerin水平與腎功能密切相關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R692.5

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本文編號：1540541