本文關鍵詞： 成纖維樣滑膜細胞 胰島素 自噬 IL-1β　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景:近年來,越來越多的研究表明糖尿病與骨關節(jié)炎之間存在相關性,關于糖尿病是否會促進骨關節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展及其相關機制逐漸成為研究熱點。成纖維樣滑膜細胞(Fibroblast-like synovial cells,FLS)作為維持關節(jié)腔內環(huán)境的重要細胞之一,亦是關節(jié)腔內炎癥的主要來源之一,其正�；顒拥母淖兛梢鸹蚣又仃P節(jié)軟骨退變。伴隨人類對胰島素抵抗認識的不斷深入,高胰島素血癥逐漸受到研究者的重視。作為人體重要激素之一,胰島素除調節(jié)能量代謝外,還對機體其他生理活動亦有重要影響。自噬是細胞維持穩(wěn)態(tài)的重要生理活動,其對多種炎癥或退行性疾病致病機制有著重要作用,但自噬的相關調節(jié)機制尚在不斷研究中。目前尚缺乏有關高濃度胰島素對滑膜成纖維細胞在自噬、趨化巨噬細胞的能力以及炎性反應活動等方面的生物學功能影響機制的研究。本研究可能有助于找尋糖尿病與骨關節(jié)炎之間潛在的聯(lián)系機制,加深對骨關節(jié)炎發(fā)病機制的認識,進而為骨關節(jié)炎的臨床管理提供新的思路。目的:體外環(huán)境下模擬高濃度胰島素環(huán)境,研究其對FLS的增殖、趨化巨噬細胞能力、自噬以及炎性反應活動等生物學功能的影響,并探討可能的分子機制。材料和方法:采用二步酶消法獲取人原代成纖維樣滑膜細胞;利用CCK-8技術檢測不同濃度胰島素處理不同時間對FLS增值能力的影響,并由此確定實驗使用胰島素濃度。利用正常培養(yǎng)24h后FLS上清液、高濃度胰島素處理24h后FLS上清液以及含高濃度胰島素的培養(yǎng)基培養(yǎng)使用Transwell方法研究高濃度胰島素對FLS趨化巨噬細胞運動能力的影響。采用Western blotting技術檢測不同時間高濃度胰島素(1000nmol/L)對FLS的Akt通路和自噬相關蛋白LC3-Ⅱ的影響。使用雷帕霉素抑制mTOR,通過檢測LC3蛋白的相對含量研究mTOR是否參與介導高濃度胰島素的作用。利用重組人IL-1β(10ng/mL)誘導24h后,使用RT-qPCR技術檢測其對IL-1 β、IL-6、MMP9表達的影響,確定炎癥模型的建立。而后是使用Western blotting技術探究IL-1 β誘導同時加入高濃度胰島素對FLS細胞自噬活動的影響。利用RT-qPCR技術檢測IL-1β、IL-6、MMP9研究高濃度胰島素對細胞炎性反應活動的影響。結果:通過二步酶消法可收獲數量可觀的成纖維樣滑膜細胞。高濃度胰島素可以刺激FLS細胞增殖,且效果呈現(xiàn)濃度依賴(p0.05)。當胰島素濃度升高到某一濃度,這種刺激效果卻不再增加。Transwell結果顯示INS+FLS組穿膜細胞數目明顯多于INS組與FLS組(p0.01)。使用胰島素(1000nmol/L)誘導FLS培養(yǎng)2h、6h、24h各組pAKT相對含量與對照組相比明顯增高,且呈時間依賴性,同時LC3-Ⅱ相對含量與對照組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。使用雷帕霉素可顯著提高LC3-Ⅱ相對含量,同時使用雷帕霉素和高濃度胰島素組LC3-Ⅱ相對含量較雷帕霉素組低,但較胰島素組高(p0.05)。使用IL-1β誘導FLS炎性反應,檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,IL-1組LC3-Ⅱ相對含量升高;與IL-1組相比,IL-1+INS組LC3-Ⅱ相對含量降低(p0.05)。RT-qPCR檢測顯示高濃度胰島素可顯著降低經IL-1 β誘導的FLS中IL-1 β、IL-6、MMP9相對表達水平(p0.05)。結論:胰島素可通過AKT/mTOR通路促進成纖維樣滑膜細胞增殖,增強FLS對巨噬細胞的趨化能力,亦可抑制FLS基礎自噬活動。此外,高濃度胰島素對IL-1β誘導的自噬活動、炎性活動有抑制作用。由此可以認為,高濃度胰島素可能影響關節(jié)滑膜正常功能,同時對IL-1β誘導的滑膜炎癥反應有抑制作用。該研究可能為骨關節(jié)炎合并糖尿病患者的臨床階梯式治療提供了新思路。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R587.1;R684.3

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