本文關(guān)鍵詞： �；敲撗跄懰� 糖尿病肝損傷 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 凋亡　出處：《吉林大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:由于生活水平的不斷提高以及不良生活習(xí)慣的養(yǎng)成等原因,糖尿病的全球發(fā)病率及死亡率正在不斷升高,已成為威脅健康的主要疾病。隨著病情進(jìn)展,可出現(xiàn)多種并發(fā)癥,如肝炎、肝纖維化、肝硬化、肝癌等糖尿病肝損傷(DLI)已成為糖尿病患者的主要死亡原因之一。由于發(fā)病隱蔽且危害嚴(yán)重,DLI日益受到重視。DLI是一個(gè)慢性復(fù)雜的病理過程,其發(fā)病機(jī)制與脂代謝異常、胰島素抵抗、氧化應(yīng)激、肝糖原貯積等相關(guān)。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)介導(dǎo)的凋亡途徑是近年來新發(fā)現(xiàn)的凋亡途徑。糖尿病患者體內(nèi)高糖、高脂及胰島素抵抗等狀態(tài)均可誘導(dǎo)ERS的發(fā)生發(fā)展。本研究旨在探討糖尿病對(duì)肝臟ERS及肝細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑牛磺脫氧膽酸(TUDCA)對(duì)糖尿病誘導(dǎo)的肝臟ERS及凋亡的抑制作用,以期達(dá)到預(yù)防DLI的目的。方法:選取10周齡FVB小鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組(CON),�；敲撗跄懰釋�(duì)照組(TUDCA),糖尿病組(DM)及牛磺脫氧膽酸處理的糖尿病組(TUDCA+DM),每組9只。DM組和TUDCA+DM組連續(xù)5天腹腔注射STZ(40 mg/kg/d)以誘導(dǎo)1型糖尿病,空腹血糖高于12mmol/L視為糖尿病造模成功。此后TUDCA組和TUDCA+DM組小鼠飲用水中加入TUDCA(500mg/kg/d)。分別在糖尿病發(fā)生后2周和2個(gè)月處死小鼠并留取肝臟及全血,全血離心后進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè),對(duì)小鼠肝臟石蠟包埋切片,并進(jìn)行TUNEL染色、Sirius Red染色、PAS染色。Trizol法提取肝臟組織總RNA,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)小鼠肝臟組織中GRP78、GPR94、ATF6、Caspase 3和CHOP的基因表達(dá)。將Hep G2細(xì)胞復(fù)蘇后,細(xì)胞融合生長(zhǎng)達(dá)60%~70%時(shí)更換無血清DMEM培養(yǎng)18~24h,TUDCA組和TUDCA+Glu組細(xì)胞使用500μg/ml TUDCA預(yù)處理12h后,Glu組和TUDCA+Glu組細(xì)胞使用50mmol/L Glu培養(yǎng)60h。Trizol法提取細(xì)胞總RNA,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中GRP78、ATF6、e IF2α、Caspase3和CHOP的基因表達(dá)。結(jié)果:1.TUDCA+DM組小鼠較DM組小鼠狀態(tài)良好。造模成功2周后,DM組小鼠體重顯著低于對(duì)照組。造模成功2個(gè)月后,TUDCA+DM組和DM組體重均顯著低于對(duì)照組,DM組小鼠下降最明顯。造模成功后2周和2個(gè)月,TUDCA+DM組及DM組小鼠血糖均顯著高于對(duì)照組。相比于DM組,TUDCA+DM組血糖明顯下降。2.生化檢測(cè)結(jié)果顯示,DM組小鼠血清GSP、ALP、TG、CHO、LDL均高于對(duì)照組,TUDCA+DM組小鼠GSP和ALP高于對(duì)照組。TUDCA+DM組小鼠各指標(biāo)均低于DM組。3.HE染色、PAS染色及Sirius Red染色示2周時(shí),DM組小鼠肝臟伴有輕度炎性浸潤(rùn)和少量糖原顆粒蓄積。2個(gè)月時(shí),TUDCA+DM組和DM組小鼠肝臟均伴有不同程度的炎性浸潤(rùn)、糖原顆粒蓄積以及纖維增生,其中DM組最為明顯。4.TUNEL染色示2周時(shí),TUDCA+DM組和DM組小鼠肝臟凋亡細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組,其中DM組凋亡細(xì)胞數(shù)最高。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果示2周時(shí),DM組小鼠肝臟GRP78、GRP94、ATF6、Caspase 3和CHOP的m RNA表達(dá)量均高于對(duì)照組,而TUDCA+DM組各標(biāo)志物表達(dá)量均較DM組明顯下降。2個(gè)月時(shí),DM組GRP78表達(dá)量高于對(duì)照組,TUDCA+DM組的表達(dá)量較DM組明顯下降。6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果示Glu組細(xì)胞GRP78、ATF6、e IF2α、Caspase 3和CHOP的m RNA表達(dá)量均高于對(duì)照組,而TUDCA+Glu組各標(biāo)志物表達(dá)量均較DM組明顯下降。結(jié)論:1.成功建立1型糖尿病小鼠模型,該模型伴有DLI。2.TUDCA能夠改善DM小鼠的體重、生化指標(biāo)及形態(tài)學(xué)變化。3.ERS介導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡是DLI發(fā)病機(jī)制之一。4.TUDCA通過抑制肝細(xì)胞ERS及其介導(dǎo)的凋亡預(yù)防DLI。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of diabetes mellitus on liver ERS and apoptosis induced by diabetes mellitus ( DLI ) in diabetic patients with diabetes mellitus ( TUDCA ) and TUDCA + DM group . The results showed that the expression of GRP78 , ATF6 , ATF6 , Caspase 3 and CHOP in DM group were significantly higher than those in control group .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 馬保金;牛磺脫氧膽酸和消膽胺增強(qiáng)倉鼠的膽道癌腫發(fā)生[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2001年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王迪;�；敲撗跄懰嵬ㄟ^抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激預(yù)防糖尿病肝損傷[D];吉林大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1532105