本文關(guān)鍵詞： �；敲撗跄懰� 糖尿病肝損傷 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激 凋亡　出處：《吉林大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:由于生活水平的不斷提高以及不良生活習慣的養(yǎng)成等原因,糖尿病的全球發(fā)病率及死亡率正在不斷升高,已成為威脅健康的主要疾病。隨著病情進展,可出現(xiàn)多種并發(fā)癥,如肝炎、肝纖維化、肝硬化、肝癌等糖尿病肝損傷(DLI)已成為糖尿病患者的主要死亡原因之一。由于發(fā)病隱蔽且危害嚴重,DLI日益受到重視。DLI是一個慢性復雜的病理過程,其發(fā)病機制與脂代謝異常、胰島素抵抗、氧化應激、肝糖原貯積等相關(guān)。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(ERS)介導的凋亡途徑是近年來新發(fā)現(xiàn)的凋亡途徑。糖尿病患者體內(nèi)高糖、高脂及胰島素抵抗等狀態(tài)均可誘導ERS的發(fā)生發(fā)展。本研究旨在探討糖尿病對肝臟ERS及肝細胞凋亡的誘導作用,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑牛磺脫氧膽酸(TUDCA)對糖尿病誘導的肝臟ERS及凋亡的抑制作用,以期達到預防DLI的目的。方法:選取10周齡FVB小鼠,隨機分為對照組(CON),牛磺脫氧膽酸對照組(TUDCA),糖尿病組(DM)及�；敲撗跄懰崽幚淼奶悄虿〗M(TUDCA+DM),每組9只。DM組和TUDCA+DM組連續(xù)5天腹腔注射STZ(40 mg/kg/d)以誘導1型糖尿病,空腹血糖高于12mmol/L視為糖尿病造模成功。此后TUDCA組和TUDCA+DM組小鼠飲用水中加入TUDCA(500mg/kg/d)。分別在糖尿病發(fā)生后2周和2個月處死小鼠并留取肝臟及全血,全血離心后進行生化指標檢測,對小鼠肝臟石蠟包埋切片,并進行TUNEL染色、Sirius Red染色、PAS染色。Trizol法提取肝臟組織總RNA,運用實時熒光定量PCR檢測小鼠肝臟組織中GRP78、GPR94、ATF6、Caspase 3和CHOP的基因表達。將Hep G2細胞復蘇后,細胞融合生長達60%~70%時更換無血清DMEM培養(yǎng)18~24h,TUDCA組和TUDCA+Glu組細胞使用500μg/ml TUDCA預處理12h后,Glu組和TUDCA+Glu組細胞使用50mmol/L Glu培養(yǎng)60h。Trizol法提取細胞總RNA,運用實時熒光定量PCR檢測細胞中GRP78、ATF6、e IF2α、Caspase3和CHOP的基因表達。結(jié)果:1.TUDCA+DM組小鼠較DM組小鼠狀態(tài)良好。造模成功2周后,DM組小鼠體重顯著低于對照組。造模成功2個月后,TUDCA+DM組和DM組體重均顯著低于對照組,DM組小鼠下降最明顯。造模成功后2周和2個月,TUDCA+DM組及DM組小鼠血糖均顯著高于對照組。相比于DM組,TUDCA+DM組血糖明顯下降。2.生化檢測結(jié)果顯示,DM組小鼠血清GSP、ALP、TG、CHO、LDL均高于對照組,TUDCA+DM組小鼠GSP和ALP高于對照組。TUDCA+DM組小鼠各指標均低于DM組。3.HE染色、PAS染色及Sirius Red染色示2周時,DM組小鼠肝臟伴有輕度炎性浸潤和少量糖原顆粒蓄積。2個月時,TUDCA+DM組和DM組小鼠肝臟均伴有不同程度的炎性浸潤、糖原顆粒蓄積以及纖維增生,其中DM組最為明顯。4.TUNEL染色示2周時,TUDCA+DM組和DM組小鼠肝臟凋亡細胞數(shù)明顯高于對照組,其中DM組凋亡細胞數(shù)最高。5.實時熒光定量PCR結(jié)果示2周時,DM組小鼠肝臟GRP78、GRP94、ATF6、Caspase 3和CHOP的m RNA表達量均高于對照組,而TUDCA+DM組各標志物表達量均較DM組明顯下降。2個月時,DM組GRP78表達量高于對照組,TUDCA+DM組的表達量較DM組明顯下降。6.實時熒光定量PCR結(jié)果示Glu組細胞GRP78、ATF6、e IF2α、Caspase 3和CHOP的m RNA表達量均高于對照組,而TUDCA+Glu組各標志物表達量均較DM組明顯下降。結(jié)論:1.成功建立1型糖尿病小鼠模型,該模型伴有DLI。2.TUDCA能夠改善DM小鼠的體重、生化指標及形態(tài)學變化。3.ERS介導的肝細胞凋亡是DLI發(fā)病機制之一。4.TUDCA通過抑制肝細胞ERS及其介導的凋亡預防DLI。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of diabetes mellitus on liver ERS and apoptosis induced by diabetes mellitus ( DLI ) in diabetic patients with diabetes mellitus ( TUDCA ) and TUDCA + DM group . The results showed that the expression of GRP78 , ATF6 , ATF6 , Caspase 3 and CHOP in DM group were significantly higher than those in control group .

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2

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本文編號：1532105