本文關(guān)鍵詞： 小檗堿 胰島素抵抗 PPARγ 脂肪細(xì)胞因子 微滴數(shù)字PCR(ddPCR)　出處：《中國中藥雜志》2016年11期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：脂肪分泌細(xì)胞因子與脂肪組織胰島素抵抗(IR)密切相關(guān),在糖尿病的發(fā)生發(fā)展研究中越來越受到重視。該實驗主要研究小檗堿對脂肪胰島素抵抗(IR)細(xì)胞PPARγ和脂肪分泌因子mRNA表達(dá)的影響,探討小檗堿增強胰島素敏感性的分子機(jī)制及微滴數(shù)字PCR(ddPCR)方法的應(yīng)用優(yōu)勢。該實驗采用ddPCR絕對定量分析簡單直觀確定合適的內(nèi)參基因,ddPCR和熒光定量法(qPCR)方法比較研究不同劑量(10,20,50,100μmol·L-1)小檗堿干預(yù)IR 3T3-L1脂肪細(xì)胞中PPARγ、脂聯(lián)素、抵抗素和瘦素mRNA表達(dá);加入GW9662研究PPARγ和脂聯(lián)素mRNA表達(dá)的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。ddPCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)β-actin在脂肪細(xì)胞中表達(dá)穩(wěn)定,適合作為內(nèi)參基因?qū)Χ縋CR數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化。ddPCR和qPCR方法均顯示與IR模型組相比,10,20,50,100μmol·L-1小檗堿呈現(xiàn)劑量依賴降低脂聯(lián)素mRNA表達(dá)(P0.01)。對于PPARγ,qPCR顯示20,50,100μmol·L-1小檗堿呈現(xiàn)劑量依賴降低其表達(dá)(P0.01),而ddPCR僅在50,100μmol·L-1降低其表達(dá)(P0.05)。PPARγ特異拮抗劑GW9662干預(yù)實驗表明脂聯(lián)素基因表達(dá)受PPARγ直接調(diào)控(P0.05)。ddPCR探針法檢測到各劑量小檗堿均劑量依賴顯著降低抵抗素和瘦素mRNA表達(dá)(P0.01)。結(jié)果揭示小檗堿調(diào)節(jié)脂聯(lián)素起到胰島素增敏作用并非通過PPARγ依賴途徑在轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平上調(diào)脂聯(lián)素表達(dá),推測可能是在翻譯后調(diào)控水平上調(diào)高聚體脂聯(lián)素比例。小檗堿下調(diào)抵抗素和瘦素表達(dá)減輕脂解改善IR。ddPCR比qPCR具有更好線性范圍和靈敏度,對低豐度表達(dá)基因檢測具有明顯的技術(shù)優(yōu)勢。
[Abstract]:Adipose secreting cytokines are closely related to insulin resistance (IRR) in adipose tissue. The effect of berberine on the expression of PPAR 緯 and mRNA of adipose insulin resistance (IRR) cells was studied. To explore the molecular mechanism of berberine in enhancing insulin sensitivity and the advantages of the microdrop digital PCRD PCR method, the method of ddPCR absolute quantitative analysis was used to determine the suitable internal reference gene D PCR and the fluorescence quantitative method was compared with the method of fluorescence quantitative analysis. Different dosages of PPAR 緯 and adiponectin in IR 3T3-L1 adipocytes were treated with berberine at a dose of 100 渭 mol 路L ~ (-1). The expression of resistin and leptin mRNA and the expression of PPAR 緯 and adiponectin mRNA in adipocytes were studied by GW9662, and the expression of 尾 -actin was found to be stable in adipocytes. It is suitable for the standardization of quantitative PCR data as an internal reference gene. DdPCR and qPCR methods both show that berberine 1020 + 50 渭 mol 路L-1 berberine decreases adiponectin mRNA expression in a dose-dependent manner compared with IR model group. For PPAR 緯 -qPCR, 20 ~ 50 ~ 100 渭 mol 路L ~ (-1) berberine presents a dose-dependent reduction of its surface. The results showed that the expression of adiponectin gene was directly regulated by PPAR 緯 and the expression of P0.05 and mRNA was significantly decreased in a dose-dependent manner by the method of PPAR 緯 -direct regulation of adiponectin gene expression. The results showed that berberine decreased the expression of resistin and leptin mRNA in a dose-dependent manner. The results showed that the effect of berberine on insulin sensitivity was not regulated by PPAR 緯-dependent pathway at the transcriptional level. It is speculated that it is possible that the ratio of adiponectin is increased at the level of posttranslational regulation. Berberine down-regulates the expression of resistin and leptin to reduce the expression of resistin and leptin to improve IR.ddPCR, which has a better linear range and sensitivity than that of qPCR. It has obvious technical advantages for low abundance expression gene detection.
【作者單位】： 江西省中醫(yī)病因?qū)W重點實驗室江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)基礎(chǔ)理論分化發(fā)展研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81460621) 江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研項目(2013A11) 江西省教育廳科研項目(GJJ14611)
【分類號】：R587.1

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本文編號：1526138