發(fā)布時間：2018-02-19 19:48

  本文關(guān)鍵詞： 電磁場 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 地塞米松 ERK1/2 增殖 分化　出處：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 1、探討正弦波電磁場對大鼠BMSC增殖及成骨分化效應(yīng)的時間依賴性。 2、研究正弦波電磁場在地塞米松干預(yù)下對BMSC增殖及成骨、成脂分化的效應(yīng)。 3、研究MEK/ERK通路在正弦波電磁場直接和在地塞米松干預(yù)下發(fā)揮效應(yīng)中所起的作用。 方法： 1、體外分離培養(yǎng)并鑒定大鼠BMSC。選用生長狀態(tài)良好的第三代細(xì)胞經(jīng)15Hz,1mT的正弦波電磁場暴磁不同天數(shù)(1d、4d、7d、10d、14d)后比較細(xì)胞增殖情況。比較電磁場每天暴磁不同時間(1h、4h、8h)對BMSC成骨相關(guān)指標(biāo)基因表達、ALP活性及胞外基質(zhì)礦化的影響。 2、用不同濃度(1nM、10nM、0.1μM、1μM)的地塞米松處理BMSC不同時間后觀察細(xì)胞增殖情況。比較不同濃度的地塞米松作用BMSC7d、14d后對其成骨、成脂相關(guān)基因和蛋白表達的影響及對細(xì)胞ALP活性、胞外基質(zhì)礦化和胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的影響。觀察15Hz,1mT SEMF與0.1μM地塞米松聯(lián)合作用5d對BMSC增殖的影響。在0.1μM地塞米松干預(yù)下,觀察比較15Hz,1mT SEMF對BMSC成骨、成脂相關(guān)基因和蛋白表達量的影響及對細(xì)胞ALP活性、細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的影響。 3、用15Hz,1mT SEMF作用BMSC1d、3d觀察其對ERK蛋白磷酸化的影響,用MEK/ERK通路特異性抑制劑—U0126與SEMF單獨或聯(lián)合作用BMSC3d,比較p-ERK蛋白表達量的變化。U0126與SEMF共同作用BMSC不同時間,觀察比較細(xì)胞增殖情況,觀察U0126對SEMF誘導(dǎo)的BMSC成骨指標(biāo)高表達的影響。檢測SEMF和地塞米松單獨或聯(lián)合作用不同時間對BMSC的ERK蛋白磷酸化的影響。研究U0126對SEMF和地塞米松聯(lián)合作用下成骨指標(biāo)ALP,成脂指標(biāo)PPARγ2、AP2基因表達量的影響。 結(jié)果： 1、分離培養(yǎng)的細(xì)胞主要呈長“紡錘形”和大多角形,貼壁生長,并具有向成骨方向和成脂方向分化的能力。SEMF暴磁可促進BMSC增殖,效應(yīng)在作用的第7d和第10d時較為明顯。SEMF暴磁可以促進BMSC成骨指標(biāo)RUNX2、BSP、OPN表達,增強ALP活性并促進細(xì)胞外基質(zhì)礦化,并且在經(jīng)過7d暴磁時,以暴磁4h/d組的效應(yīng)較為明顯,而經(jīng)過14d暴磁后,以暴磁1h/d組的效應(yīng)較為明顯。 2、較高濃度(0.1μM、1μM)的地塞米松抑制BMSC增殖而較低濃度(1nM、10nM)的地塞米松促進其增殖。在早期,較高濃度的地塞米松抑制成骨相關(guān)基因的表達,抑制堿性磷酸酶的活性;在晚期,地塞米松促進成骨指標(biāo)的表達但是不能增加細(xì)胞外鈣質(zhì)沉積。地塞米松濃度和作用時間依賴性的促進成脂指標(biāo)的表達,促進細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。SEMF暴磁后部分消除地塞米松的抑制增殖效應(yīng)；在早期,SEMF可以部分消除地塞米松的抑制成骨指標(biāo)表達、抑制堿性磷酸酶活性的效應(yīng),晚期,進一步促進地塞米松的促進成骨效應(yīng)。在作用的各個階段,SEMF均可部分抑制地塞米松的促成脂效應(yīng)。 3、經(jīng)過SEMF暴磁處理后,BMSC的p-ERK蛋白表達升高,并且這種效應(yīng)可被U0126所抑制。U0126可以部分或完全消除SEMF對BMSC的促進增殖效應(yīng)和誘導(dǎo)成骨分化效應(yīng)。15Hz,1mT SEMF短時間(30min)暴磁即可引起ERK磷酸化,而地塞米松抑制其磷酸化,SEMF暴磁1h可以部分消除地塞米松的抑制ERK磷酸化的效應(yīng)。而且SEMF在地塞米松干預(yù)環(huán)境下的促進BMSC成骨分化、抑制其成脂分化效應(yīng)可以被U0126部分抑制。 結(jié)論： 1、SEMF暴磁可以直接促進BMSC增殖、誘導(dǎo)其成骨分化,并且此效應(yīng)存在作用時間依賴性。 2、地塞米松濃度和作用時間依賴性的影響B(tài)MSC增殖和成骨、成脂分化；SEMF在地塞米松干預(yù)環(huán)境下仍可發(fā)揮促進BMSC增殖及成骨分化、抑制其成脂分化的效應(yīng)。 3、MEK/ERK通路在SEMF直接促進BMSC增殖、誘導(dǎo)其成骨分化及在地塞米松干預(yù)下促進BMSC成骨分化抑制其成脂分化過程中均起重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R580

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本文編號：1517960