本文關(guān)鍵詞： KLF14 mRNA 蛋白 表達(dá) KLF14 hcepa1-6細(xì)胞 葡萄糖攝取 PI3K/Akt信號通路 KLF14 hepa1-6細(xì)胞 胰島素抵抗 葡萄糖攝取 Akt　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分 KLF14基因mRNA及蛋白在小鼠及人類代謝相關(guān)組織中的表達(dá)目的：觀察KLF14基因mRNA及蛋白在C57BL/6J,HFD-C57BL/6J、 db/db小鼠及正常人、T2DM患者代謝相關(guān)組織中的表達(dá)情況。方法：提取小鼠肝臟、脂肪、肌肉組織及正常人、T2DM病人脂肪、肌肉組織的RNA和蛋白。RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,然后通過實時熒光定量PCR (real-time PCR)檢測KLF14基因mRNA在各組織中的表達(dá)情況。采用Western blot檢測KLF14蛋白在各組織的表達(dá)情況。結(jié)果：KLF14 mRNA和蛋白在HFD-C57BL/6J、db/db小鼠肝臟、脂肪、肌肉組織中的表達(dá)明顯低于C57BL/6J (P0.01);而且在T2DM病人中脂肪和肌肉中KLF14 mRNA和蛋白的表達(dá)也明顯低于正常人(P0.01)。結(jié)論：KLF14 mRNA和蛋白在HFD-C57BL/6J、db/db小鼠及T2DM病人代謝相關(guān)組織中表達(dá)明顯偏低,提示KLF14可能在代謝相關(guān)疾病中發(fā)揮重要作用。第二部分KLF14基因表達(dá)變化對胰島素信號路中信號分一子的影響目的：探討KLF14基因過表達(dá)對PI3K/Akt信號通路中關(guān)鍵信號分子的影響。方法：采用pIRES2-KLF14質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hepa1-6細(xì)胞建立KLF14過表達(dá)模型。利用[3H]-2-脫氧-D-葡萄糖攝取法檢測Hepa1-6細(xì)胞對葡萄糖的攝取作用;采用Western blot檢測PI3K/Akt信號通路中p-InsR/ InsR、p-IRS1/IRS1、p-Akt/Akt、p-GSK3β/GSK3β的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：在胰島素(100nM)刺激下,KLF14過表達(dá)明顯上調(diào)細(xì)胞葡萄糖攝取率(P0.05), p-InsR、p-IRS1、p-Akt、p-GSK3p的磷酸化水平顯著增強(P0.05或P0.01)。給予PI3K抑制劑(LY294002)作用后,細(xì)胞葡萄糖攝取率及p-Akt、p-GSK3β的磷酸化水平明顯下降(P0.01)。結(jié)論：KLF14可能通過激活胰島素經(jīng)典通路-—PI3K/Akt信號通路增加胰島素敏感性,改善肝細(xì)胞胰島素抵抗。第三部分KLF14基因過表達(dá)改善肝細(xì)胞胰島素抵抗及其相關(guān)機制研究目的：探討KLF14基因過表達(dá)改善肝細(xì)胞胰島素抵抗及其可能的分子機制研究方法：采用一定高濃度胰島素和(或)葡萄糖作用于Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞,構(gòu)建肝細(xì)胞胰島素抵抗模型；采用MTT法檢測細(xì)胞活率；運用KLF14過表達(dá)質(zhì)粒pIRES2-KLF14上調(diào)肝細(xì)胞KLF14表達(dá)；采用[3H]-2-脫氧-D-葡萄糖攝取法檢測Hepa1-6細(xì)胞對葡萄糖的攝取作用；采用Western blot檢測胰島素信號通路中p-Akt/Akt蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：給予Hepal-6細(xì)胞高濃度胰島素(10-8M)、葡萄糖(25mM)作用24小時,Hepal-6細(xì)胞葡萄糖攝取率及p-Akt表達(dá)明顯下降(P0.01)；然而,在胰島素(100nM)刺激下,將細(xì)胞KLF14基因表達(dá)上調(diào)可明顯改善高濃度胰島素和(或)高濃度葡萄糖作用引起的葡萄糖攝取率及p-Akt表達(dá)下降(P0.05或P0.01),而在給予細(xì)胞PI3K抑制劑(LY294002)之后,葡萄糖攝取率及p-Akt水平明顯降低(P0.05or P0.01)。另外,采用正常人及T2DM病人血清分別作用Hepa1-6細(xì)胞24小時,在胰島素(100nM)刺激下,T2DM病人血清可使細(xì)胞葡萄糖糖攝取率及p-Akt水平明顯降低,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05 orP0.01),當(dāng)pIRES2-KLF14質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,細(xì)胞葡萄糖糖攝取率及p-Akt水平明顯得到改善(P0.05),而LY294002則可顯著降低KLF14的作用(P0.05 orP0.01)。結(jié)論：KLF14基因過表達(dá)可能通過活化PI3K/Akt信號通路,增加胰島素敏感性,從而改善肝細(xì)胞胰島素抵抗。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R58

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本文編號：1513473