本文關(guān)鍵詞： 免疫球蛋白E(IgE) 白介素4 CD40抗體 信號通路　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景及目的:近年來,過敏性疾病的發(fā)生率越來越高,引起了西方國家乃至全球的關(guān)注,過敏性疾病對人類健康所造成的影響已成為一個全球性普遍關(guān)注的問題�，F(xiàn)如今我國有1.3億人正在飽受過敏性疾病的困擾,而全球人群發(fā)病率也呈逐年增高趨勢,嚴(yán)重地影響了人們的生活質(zhì)量。而對于此類疾病的治療,目前只是通過控制患者的一些過敏性癥狀,而不能徹底治愈。目前我們所使用的抗過敏治療大都是以降低血清中的游離血清中游離的免疫球蛋白E(Ig E)的含量為主,如奧馬珠單抗治療過敏性疾病,通過與游離Ig E結(jié)合而顯著降低游離Ig E水平,阻斷Ig E與肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞結(jié)合,從而抑制肥大細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞的活化,減少和防止炎癥介質(zhì)的釋放。在過敏性疾病中,免疫球蛋白E(immunoglobulin E,Ig E)主要介導(dǎo)了I型過敏反應(yīng)。我們所使用的治療并不能從源頭降低免疫球蛋白E(Ig E)的產(chǎn)生。因此,了解Ig E產(chǎn)生的信號通路可能能為過敏性疾病的治療提供新的靶點和思路。過去的研究表明,IL-4和CD40在Ig E的產(chǎn)生過程中必不可少。有研究指出,在過敏性患者的外周血單核細(xì)胞中(PBMc)中,Ig E產(chǎn)生的信號調(diào)節(jié)與NF-κB和STAT6信號通路有關(guān),但是研究B細(xì)胞株中Ig E產(chǎn)生的信號通路調(diào)節(jié)罕見報導(dǎo)。因此,本研究在此基礎(chǔ)上,采用兩種特異性的信號通路的抑制劑,了解在B細(xì)胞株U266細(xì)胞株中免疫球蛋白E(Ig E)產(chǎn)生的信號通路調(diào)節(jié),為疾病的治療提供新的思路和方向。方法:采用不同濃度的白介素4(IL-4)或不同濃度的抗CD40抗體(CD40)誘導(dǎo)B細(xì)胞株,使用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定免疫球蛋白E(Ig E)的濃度變化,以及采用q-RTPCR的方法檢測誘導(dǎo)的Ig E的重鏈基因(εGLT)的變化,選擇最合適的誘導(dǎo)濃度;采用CCK8細(xì)胞增殖、毒性檢測的實驗方法,檢測不同濃度的兩種抑制劑對細(xì)胞活力的影響;選取合適的抑制劑濃度,并使用STAT6特異性抑制劑(A177-1726)和NF-κB特異性的抑制劑(JSH-23)抑制這兩條信號通路,檢測上清中免疫球蛋白E(Ig E)和Ig E的重鏈基因(εGLT),以及某些相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果:(1)不同濃度的IL-4或CD40均可以誘導(dǎo)B細(xì)胞株產(chǎn)生免疫球蛋白E(Ig E)以及能夠觀察到Ig E重鏈基因的表達(dá)變化;(2)使用NF-KB特異性抑制劑JSH-23抑制通路,可以明顯觀察到免疫球蛋白E表達(dá)水平的降低,以及Ig E重鏈基因表達(dá)的變化;(3)同樣地,使用STAT6特異性抑制劑,免疫球蛋白E的濃度以及重鏈基因的表達(dá)均降低,以及其相關(guān)蛋白的表達(dá)也明顯下降;結(jié)論:本實驗結(jié)果指出,NF-κB和STAT6信號通路在U266細(xì)胞株產(chǎn)生免疫球蛋白E(Ig E)的過程中有重要的作用,兩者在Ig E的產(chǎn)生過程中起協(xié)同作用,了解B細(xì)細(xì)胞株中Ig E產(chǎn)生過程的調(diào)節(jié),可以為臨床治療過敏性疾病奠定理論研究基礎(chǔ),并為尋找治療靶點提供參考價值。
[Abstract]:Background and objective: in recent years, the incidence of allergic diseases has become increasingly high, which has attracted the attention of western countries and even the whole world. The impact of allergic diseases on human health has become a global concern. Nowadays, 130 million people in China are suffering from allergic diseases, and the incidence of the global population is also increasing year by year. It seriously affects people's quality of life. And the treatment of these diseases is now done only by controlling some of the allergic symptoms of the patients. At present, most of the antiallergic therapy we use is mainly to reduce the content of free immunoglobulin (Ig) in serum, such as omazumab in the treatment of allergic diseases. By binding with free IgE, the level of free IgE was significantly decreased, and the binding of IgE to mast cells and eosinophils was blocked, thus inhibiting the activation of mast cells and eosinophils. To reduce and prevent the release of inflammatory mediators. In allergic diseases, immunoglobulin Eg Eg) mainly mediates type I allergic reactions. The treatment we use does not reduce the production of immunoglobulin Ig E from the source. Understanding the signal pathway produced by IgE may provide new targets and ideas for the treatment of allergic diseases. Previous studies have shown that IL-4 and CD40 are essential in the production of IgE. The signal regulation of Ig E in peripheral blood monocytes of allergic patients is related to NF- 魏 B and STAT6 signaling pathway, but it is rare to study the regulation of Ig E signaling pathway in B cell line. Two specific signal pathway inhibitors were used to understand the regulation of the signal pathway produced in B cell line U266. Methods: B cell lines were induced by different concentrations of IL-4 (IL-4) or anti-CD40 (anti CD40 antibody CD40). The changes of heavy chain genes (蔚 GLTs) of induced IgE were detected by q-RT PCR and the most suitable concentration was selected, and the effects of two inhibitors of different concentrations on cell viability were detected by CCK8 cell proliferation and toxicity test. STAT6 specific inhibitor A177-1726) and NF- 魏 B specific inhibitor JSH-23) were used to inhibit these two signaling pathways. The heavy chain gene (蔚 GLTG) and the changes of some related proteins in the supernatant were detected. The results showed that different concentrations of IL-4 or CD40 could induce the production of immunoglobulin Eg E from B cell lines and the expression of Ig could be observed. The expression of E heavy chain gene was changed by using JSH-23, a specific inhibitor of NF-KB, to inhibit the transduction pathway. The decrease of immunoglobulin E expression and the change of IgE heavy chain gene expression were also observed. Similarly, the concentration of immunoglobulin E and the expression of heavy chain gene were decreased with the use of STAT6 specific inhibitor. Conclusion: NF- 魏 B and STAT6 signaling pathway play an important role in the production of immunoglobulin Ig E in U266 cell line, and they play a synergistic role in the production of IgE. Understanding the regulation of IgE production in B cell lines can lay a theoretical foundation for clinical treatment of allergic diseases and provide a reference value for finding therapeutic targets.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R593.1

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本文編號：1506907