發(fā)布時(shí)間：2018-02-10 03:40

  本文關(guān)鍵詞： 脂肪干細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 內(nèi)皮分化 內(nèi)皮細(xì)胞 糖尿病足　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2016年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的研究脂肪干細(xì)胞(ASCs)向內(nèi)皮分化的能力,并與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對比。方法從SD大鼠中分離培養(yǎng)ASCs、BMSCs,選擇生長良好的一定代數(shù)的細(xì)胞,流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志物;用CCK-8法繪制細(xì)胞生長曲線;進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)皮誘導(dǎo)3周,用q PCR檢測內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物CD31、KDR、v WF m RNA的表達(dá);免疫熒光染色觀察表面抗原CD31的表達(dá);用Dil標(biāo)記的乙�；兔芏戎鞍�(Dil-Ac-LDL)檢測誘導(dǎo)組細(xì)胞的攝取功能;在Matrigel上驗(yàn)證誘導(dǎo)組細(xì)胞的成管能力。結(jié)果成功分離培養(yǎng)大鼠ASCs和BMSCs,形態(tài)上,ASCs與BMSCs類似,均呈長梭形、紡錘狀,類成纖維細(xì)胞樣形態(tài);流式檢測結(jié)果顯示BMSCs與ASCs均高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29(100%與96.9%)、CD90(96.5%與99.2%),低表達(dá)造血系細(xì)胞表面標(biāo)志物CD45(3.9%與0.8%),證實(shí)所提取的是間充質(zhì)干細(xì)胞;CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,ASCs的增殖速度比BMSCs的增殖速度快(P0.05)。標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)皮誘導(dǎo)后,q PCR顯示誘導(dǎo)組BMSCs和ASCs表達(dá)CD31、KDR、v WF m RNA水平均高于未誘導(dǎo)組(P0.05);免疫熒光染色顯示CD31抗原表達(dá)在誘導(dǎo)組的細(xì)胞膜表面;熒光顯微鏡下誘導(dǎo)組細(xì)胞攝取Dil-Ac-LDL(未誘導(dǎo)組不攝取);誘導(dǎo)組細(xì)胞在Matrigel上均具備成管能力,證實(shí)誘導(dǎo)后的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。結(jié)論表明BMSCs和ASCs均可誘導(dǎo)向內(nèi)皮細(xì)胞分化,ASCs廣泛分化為內(nèi)皮細(xì)胞的時(shí)間更短且增殖能力更強(qiáng),提示ASCs比BMSCs更具有應(yīng)用前景。
[Abstract]:Objective to study the ability of adipose stem cells (ASCs) to differentiate into endothelial cells and compare them with BMSCs (bone marrow mesenchymal stem cells). The cell growth curve was plotted by CCK-8 method, the expression of CD31kDRV WFM RNA was detected by Q PCR for 3 weeks after induction of standard endothelial cells, and the expression of surface antigen CD31 was observed by immunofluorescence staining. Acetylated low density lipoprotein (Dil) labeled Dil-Ac-LDL was used to detect the uptake function of the cells in the induction group, and to verify the ability of the induced cells to form tube-forming cells on Matrigel. Results ASCs and BMSCs were isolated and cultured successfully. The cells were similar to BMSCs in morphology, both of which were fusiform and spindle-shaped. Fibroblast-like morphology; The results of flow cytometry showed that both BMSCs and ASCs expressed 100% and 96.9% of mesenchymal stem cell surface markers, and 96.5% and 99.2% of mesenchymal stem cell surface markers, respectively, and low expression of CD45% and 0.8% of mesenchymal stem cell surface markers, respectively. The results of proliferation test showed that the extracted mesenchymal stem cells were CCK-8. The expression of BMSCs and ASCs in the induction group was higher than that in the uninduced group (P 0.05), and the expression of CD31 antigen on the surface of the cell membrane was detected by immunofluorescence staining. The induction of Dil-Ac-LDL (no uptake of Dil-Ac-LDL) by fluorescence microscope, the ability of tube-forming on Matrigel was found in all the induced cells. Conclusion both BMSCs and ASCs can induce endothelial cells to differentiate into endothelial cells more widely and have shorter time and stronger proliferative ability, suggesting that ASCs is more promising than BMSCs.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科;澳門大學(xué)健康科學(xué)學(xué)院;
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(S2013010016045) 廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(201508020262)
【分類號】：R587.2

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本文編號：1499571