本文關(guān)鍵詞： 電磁輻射 皮層神經(jīng)元 Ca~(2+) TRPC VGCC　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景和目的:隨著科技的發(fā)展和人們生活水平的不斷提高,個(gè)人移動(dòng)通訊設(shè)備被廣泛使用,射頻電磁輻射(RF-EMF)可能帶來(lái)的種種不良效應(yīng)和安全隱患越來(lái)越被大眾所關(guān)注。研究表明,神經(jīng)系統(tǒng)是電磁輻射暴露受累的重要靶點(diǎn),而神經(jīng)元Ca2+調(diào)節(jié)失衡與多種神經(jīng)系統(tǒng)損害相關(guān),因此射頻電磁輻射與鈣平衡的關(guān)系研究已成為近年來(lái)該研究領(lǐng)域關(guān)注的方向。射頻電磁輻射引起細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)節(jié)失衡的報(bào)道很多,但射頻電磁輻射誘導(dǎo)鈣失衡的完整機(jī)制還不清楚,在神經(jīng)元細(xì)胞膜鈣離子通道途徑研究射頻輻射致胞內(nèi)鈣失衡的機(jī)制報(bào)道甚少。為此,本研究擬從瞬時(shí)受體電位C(TRPC)通道和電壓門控通道(VGCC)途徑,探討RF-EMF對(duì)神經(jīng)元鈣平衡的影響和發(fā)生機(jī)制,以期為電磁輻射致神經(jīng)損害的機(jī)制研究提供更多線索和參考。方法:(1)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元(PCCNs)和分組:原代皮層神經(jīng)元取自0-3天齡新生大鼠大腦,胰酶消化后培養(yǎng)8天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組:假暴露組、電磁輻射暴露組、假暴露+SKF-96365處理組、電磁輻射暴露+SKF-96365處理組。SKF-96365為TRPC通道阻斷劑。(2)神經(jīng)元電磁輻照暴露模型:暴露系統(tǒng)為sXc-1800,頻率1800 MHz,比吸收率4 W/kg,5min開(kāi)、10 min關(guān),連續(xù)暴露。(3)RF-EMF暴露后神經(jīng)元死亡率和活力檢測(cè):采用LDH和CCK-8試劑盒,分別檢測(cè)暴露結(jié)束時(shí)和結(jié)束后24 h PCCNs的死亡率和活力。(4)RF-EMF暴露對(duì)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)影響觀察:β-III微管蛋白(Tuj-1)免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)RF-EMF暴露后神經(jīng)元突起生長(zhǎng)狀況,并通過(guò)在暴露前加入TRPC通道阻斷劑SKF-96365預(yù)處理,觀察比較阻斷TRPC通道后RF-EMF暴露對(duì)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)的影響。(5)TRPC1、TRPC3蛋白表達(dá)檢測(cè):采用Western blot檢測(cè)RF-EMF暴露12、24、48 h PCCNs中TRPC1、TRPC3通道蛋白表達(dá)水平。(6)檢測(cè)[Ca2+]i變化:Fluo-4 AM染色,共聚焦顯微鏡測(cè)RF-EMF暴露24 h結(jié)束時(shí),PCCNs鈣庫(kù)操縱性鈣內(nèi)流(SOCE)和K+誘導(dǎo)鈣內(nèi)流的變化。(7)膜片鉗全細(xì)胞技術(shù)vgcc電流檢測(cè):rf-emf暴露24h結(jié)束時(shí),施加不同電壓激活通道開(kāi)放,全細(xì)胞模式記錄pccnsvgcc電流。結(jié)果:(1)rf-emf暴露結(jié)束時(shí)和結(jié)束后24h,輻照組pccns死亡率和活力檢測(cè)結(jié)果與相應(yīng)對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異(p0.05)。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)中的電磁輻射劑量未對(duì)神經(jīng)元存活和活力造成明顯影響,可作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究的電磁暴露模型。(2)rf-emf暴露24h,pccns中trpc1和trpc3蛋白表達(dá)分別降低24%和23%,且與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說(shuō)明trpc通道蛋白表達(dá)受抑,由此可能造成通道功能受損。(3)skf-96365處理可使假暴露組pccnssoce下降24%,rf-emf暴露24h,pccns的soce下降54%,兩者與對(duì)照組比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。rf-emf暴露+skf-96365聯(lián)合處理組soce下降20%,該變化與單純r(jià)f-emf暴露組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說(shuō)明加入skf-96365并未有效增強(qiáng)rf-emf暴露引起的soce下降效應(yīng),間接提示rf-emf引起trpc通道介導(dǎo)鈣內(nèi)流途徑受損參與rf-emf對(duì)神經(jīng)元soce的抑制。(4)rf-emf暴露48h可引起pccns突起總長(zhǎng)度、初級(jí)突起數(shù)和分支數(shù)分別下降20%、12%、31%,與假暴露組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。假暴露skf-96365處理組,突起總長(zhǎng)度、初級(jí)突起數(shù)、分支數(shù)分別下降10%、12%、24%,與假暴露組比較變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而暴露skf-96365聯(lián)合處理組突起總長(zhǎng)度、突起數(shù)、分支數(shù)的變化與暴露組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說(shuō)明rf-emf暴露引起pccnstrpc通道受損造成的鈣平衡失調(diào),可引起神經(jīng)元突起生長(zhǎng)受抑。(5)rf-emf暴露24h,不同電壓誘導(dǎo)的高閾值激活vgcc電流大小和電流密度與假暴露組相比,差異沒(méi)有顯著意義(p0.05)。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖聄f-emf暴露對(duì)pccnsvgcc的激活未見(jiàn)影響。(6)rf-emf暴露24h,k+誘導(dǎo)的pccns鈣內(nèi)流升高與假暴露組相比降低了26%,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。加入tg處理后,k+誘導(dǎo)的神經(jīng)元鈣內(nèi)流升高與假暴露組相比沒(méi)有顯著差異(p0.05)。說(shuō)明rf-emf暴露對(duì)vgcc介導(dǎo)鈣內(nèi)流的功能沒(méi)有影響,但對(duì)胞內(nèi)調(diào)控鈣內(nèi)流通路有影響。結(jié)論:在本實(shí)驗(yàn)電磁輻射暴露模型下,rf-emf連續(xù)暴露24h,造成trpc1、trpc3蛋白表達(dá)降低,導(dǎo)致神經(jīng)元soce減少,神經(jīng)元鈣動(dòng)力特性改變;本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ拖挛从^察到rf-emf暴露24h對(duì)高閾值激活vgcc電流特性和vgcc介導(dǎo)鈣內(nèi)流功能的影響,但是會(huì)通過(guò)對(duì)胞內(nèi)調(diào)控鈣內(nèi)流途徑的影響,造成K+誘導(dǎo)的神經(jīng)元鈣動(dòng)力特性改變。我們發(fā)現(xiàn),在RF-EMF對(duì)TRPC和VGCC途徑影響的研究中,均觀察到了PCCNs鈣動(dòng)力特性的改變,雖然引起的途徑不同,但這可能就是造成原代皮層神經(jīng)元突起生長(zhǎng)減緩的影響機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of RF - EMF on neuronal calcium homeostasis and to investigate the effects of RF - EMF on neuronal calcium homeostasis . ( 5 ) The expression of TRPC1 , TRPC3 protein was detected by Western blot . The expression level of TRPC1 and TRPC3 was detected by Western blot . ( 6 ) The expression of trpc1 and trpc3 protein in pccns decreased by 24 % and 23 % after exposure to RF - emf . ( 4 ) The effect of rf - emf exposure on the activation of pccnsvgcc was not significant ( p . 05 ) . The effect of rf - emf exposure on the activation of pccnsvgcc was not significant ( p . 05 ) .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R594.8

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本文編號(hào)：1492306