本文關(guān)鍵詞：阿司匹林對大鼠破骨細(xì)胞分化成熟及RANK基因表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2013年

阿司匹林對大鼠破骨細(xì)胞分化成熟及RANK基因表達(dá)的影響

張毅  

【摘要】：背景：骨重建的內(nèi)穩(wěn)態(tài)是由成骨細(xì)胞（Osteoblast，OB）的骨形成和破骨細(xì)胞（Osteoclast，OC）的骨吸收共同協(xié)調(diào)完成的，破骨細(xì)胞的異常增多常導(dǎo)致這種內(nèi)穩(wěn)態(tài)被打亂。破骨細(xì)胞的分化成熟依賴于核激活因子κB受體（Receptor Activator ofNuclear Factor-κB，RANK，又稱為TNFRSF11A）的配體（Receptor Activator of NuclearFactor-κB Ligand，RANKL）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（Macrophage Colony-StimulatingFactor，M-CSF）的作用。誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的關(guān)鍵是由多種細(xì)胞因子介導(dǎo)的OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)和RANK信號通路。代謝性、退行性和腫瘤性骨疾病或骨溶解都涉及到了OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)，OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)在破骨細(xì)胞形成中的核心作用使得RANK成為潛在治療骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis，OP）的核心靶點。 本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)小劑量的阿司匹林可以有效的使去勢雌性大鼠骨質(zhì)疏松模型的骨密度增加，提高骨的力學(xué)強度，改善骨小梁的三維結(jié)構(gòu)和促進骨小梁的重建~([1,2])。且在人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞（Bone Mesenchymal Stem Cells, BMSC）體外培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)低中濃度阿司匹林作用于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞可促進其骨向分化和成骨細(xì)胞特性表達(dá)，表明阿司匹林有促進骨代謝合成的作用[3]，然而其防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（postmenopausal osteoporosis, PMOP）發(fā)病的分子機制尚不明了，文獻報道可能與絕經(jīng)后失去雌激素的保護、破骨細(xì)胞激活而進入骨的高代謝狀態(tài)有關(guān)[4]，阿司匹林是否通過該途徑而發(fā)揮抗絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松作用？這正是本研究希望闡明的問題。 目的：研究不同濃度阿司匹林對體外培養(yǎng)大鼠破骨細(xì)胞的分化成熟及RANK基因表達(dá)水平的影響，以探討阿司匹林防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥可能的分子機制，從而為阿司匹林創(chuàng)新應(yīng)用于防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供全新的理論依據(jù)。 方法：（1）建立由可溶性核激活因子κB受體的配體（soluble ReceptorActivatorof Nuclear Factor-κB Ligand, sRANKL）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（MacrophageColony-Stimulating Factor, M-CSF）共同作用的大鼠破骨細(xì)胞原代誘導(dǎo)培養(yǎng)體系。（2）實驗分為6組：A組正常對照組；B組雌激素組（17β-雌二醇10-6mmol/L）；不同濃度的阿司匹林組（C組0.25mmol/L、D組0.5mmol/L、E組1.0mmol/L、F組1.5mmol/L）。（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)后于不同時間點對各組破骨細(xì)胞進行抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-Resistant Acid Phosphatase，TRAP）染色，觀察細(xì)胞形態(tài)，并計數(shù)破骨細(xì)胞數(shù)量。（4）將各組破骨細(xì)胞接種于骨磨片上，建立破骨細(xì)胞-骨磨片活性分析模型，于不同時間點對骨磨片進行光鏡和掃描電鏡觀察，分析計算骨吸收陷窩面積比例。（5）RT-PCR技術(shù)檢測破骨細(xì)胞RANK基因mRNA的表達(dá)。（6）ELISA法檢測破骨細(xì)胞RANK蛋白分泌表達(dá)情況。 結(jié)果：（1）與正常對照組相比，雌激素組和各阿司匹林實驗組的破骨細(xì)胞數(shù)量和骨吸收陷窩面積均低于正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；且隨著阿司匹林濃度的增加，阿司匹林組TRAP陽性多核破骨細(xì)胞數(shù)量、骨吸收陷窩面積逐漸減少直至消失，組間差異亦有顯著差異（P＜0.05）。低濃度阿司匹林組（0.25mmol/L）與雌激素組相比沒有明顯差異；但中、高濃度阿司匹林實驗組（0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L）破骨細(xì)胞數(shù)量和骨吸收陷窩面積減少，與雌激素組有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。 （2）RT-PCR結(jié)果顯示，與正常對照組相比，雌激素組和阿司匹林各組均可抑制破骨細(xì)胞RANK基因表達(dá)，且阿司匹林的抑制作用具有劑量依賴性（P＜0.05）。 （3）ELISA結(jié)果顯示，與正常對照組相比，雌激素組和阿司匹林各組均可抑制破骨細(xì)胞RANK蛋白表達(dá)水平，且阿司匹林的抑制作用具有劑量依賴性（P＜0.05）。 結(jié)論：阿司匹林具有體外抑制大鼠破骨細(xì)胞RANK基因和蛋白表達(dá)的作用，也可以抑制破骨細(xì)胞的分化成熟及骨吸收功能，且具有劑量依賴性，這可能是阿司匹林通過抑制破骨細(xì)胞而具有抗骨質(zhì)疏松作用的關(guān)鍵分子機制。該研究結(jié)果為阿司匹林這一老藥創(chuàng)新應(yīng)用于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的治療提供了理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R580
【目錄】：

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